[发明专利]基于表面增强拉曼光谱检测细胞脱颗粒的方法

摘要

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种细胞脱颗粒的检测方法，具体涉及一种基于表面增强拉曼光谱检测细胞脱颗粒的方法。包括以下步骤：细胞脱颗粒组分产生并提取、SERS光谱检测细胞脱颗粒组分、细胞脱颗粒SERS光谱数据处理及特征峰选取、建立β‑氨基己糖苷酶释放率与细胞脱颗粒程度相关性。本发明在检测肥大细胞不同程度脱颗粒时，与传统的检测方法即检测β‑氨基己糖苷酶相比，具有一致的结论，但本发明方法具有高效和便捷的检测特性。

主权项

1.一种基于表面增强拉曼光谱检测细胞脱颗粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）细胞脱颗粒组分产生并提取：体外培养肥大细胞，当处于对数生长分裂期时，对其离心和丢弃培养液，用新鲜培养液重悬，调整菌体浓度为103‑1010个/mL，按10~75%v/v的接种量接种于24孔板或培养皿，培养1‑72h；取出后500‑1500rpm离心3‑20min，弃上清，添加pH为6‑8、1‑20mM的PBS重悬；对肥大细胞进行不同药物浓度梯度刺激或使用不同激光波长辐照后培养1‑24h，离心取上清储存于离心管中；（2）SERS光谱检测细胞脱颗粒组分：使用制备好的SERS增强基底浓缩胶体溶液增强SERS基底，取（1）中提取的肥大细胞脱颗粒组分与SERS增强基底浓缩胶体溶液等体积混合并摇匀，取出滴加在SERS检测的基底上，自然晾干后利用共聚焦拉曼光谱进行细胞脱颗粒组分SERS光谱检测；（3）细胞脱颗粒SERS光谱数据处理及特征峰选取：步骤（2）所获得的肥大细胞脱颗粒组分SERS光谱数据进行五阶多项式拟合抠除荧光背景噪声，再进行光谱强度峰值归一化或面积归一化处理；使用SPSS软件结合主成分分析和线性判别分析处理光谱数据；对光谱数据从400‑3000 cm‑1波数范围选取3‑4个变化最为显著的谱峰作为肥大细胞脱颗粒程度SERS光谱特征峰；（4）建立β‑氨基己糖苷酶释放率与细胞脱颗粒程度相关性；使用酶标仪检测经促脱颗粒药物或不同激光波长作用下肥大细胞β‑氨基己糖苷酶释放率用于体现肥大细胞脱颗粒程度；β‑氨基己糖苷酶释放率作为肥大细胞发生脱颗粒的程度标志，用于检验SERS光谱技术检测脱颗粒组分；SERS光谱特征峰的不同反映脱颗粒组分中不同的生物物质和含量；β‑氨基己糖苷酶释放率按照如下公式计算所得：。