[发明专利]一种基于Au@NiFe MOFs的双猝灭竞争型电致化学发光传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种基于新型纳米材料Au@NiFe MOFs的双重猝灭竞争型型电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，属于电化学发光传感器领域，首次以纳米多孔Au@NiFe MOFs作为双重猝灭标记物标记抗原，利用Ru(bpy)32+/Zr‑MOFs作为发光体构建双重猝灭竞争型传感器。鉴于纳米多孔Au@NiFe MOFs材料的双重猝灭效果，传感器的灵敏度将被大大提升。根据不同浓度标准溶液引起的电化学发光信号强度的不同，实现对雌激素己烯雌酚的超灵敏检测。

主权项

1.一种基于Au@NiFe MOFs的双重猝灭型电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，步骤如下：（1）Ru(bpy)32+/Zr‑MOFs的制备将30 mg ~ 45 mg 2, 2‑联吡啶‑5, 5‑二羧酸溶于12 mL N, N‑二甲基甲酰胺中，加入120 μL ~ 360 μL三乙胺，然后加入1 mL ~ 5 mL醋酸，搅拌10 min ~ 15 min得到有机前驱体溶液，将30 mg ~ 50 mg ZrCl4分散于16 mL N, N‑二甲基甲酰胺中，搅拌10 min ~ 15 min得到金属溶液前驱体，将两种前躯体溶液混合于50 mL聚四氟乙烯高压反应釜中，70 ℃ ~ 90 ℃反应24 h，离心分离，用N, N‑二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇分别洗涤数次，35 ℃真空干燥12 h，得到白色固体Zr‑MOFs；将18 mg ~ 24 mg Zr‑MOFs分散于10 mL乙醇溶液中，搅拌5 min后和10 mL含有Ru(bpy)3Cl2·6H2O（1 mg ~ 3 mg）的N, N‑二甲基甲酰胺溶液混合，80 ℃ ~ 100 ℃搅拌12 h，N, N‑二甲基甲酰胺、乙醇分别洗涤数次，35 ℃真空干燥12 h，得到橙黄色固体Ru(bpy)32+/Zr‑MOFs；（2）Ru(bpy)32+/Zr‑MOFs标记抗体孵化物溶液的制备将10 mg的Ru(bpy)32+/Zr‑MOFs分散于1 mL EDC/NHS溶液中室温震荡反应4 h ~ 8 h，超纯水洗去多余EDC/NHS，然后分散到1 mL pH = 7.5的PBS中，加入4 μL ~ 6 μL、6 mg/mL的抗体，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12h ~ 24 h，4 ℃离心分离，最后分散于pH = 7.5的PBS缓冲溶液中，制得0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Ru(bpy)32+/Zr‑MOFs标记偶联抗体，储存于4 ℃中备用；（3）纳米多孔材料Au@NiFe MOFs的制备将140 mg ~ 160 m六水合氯化镍和260 mg ~ 280 mg二水合柠檬酸三钠分散于20 mL超纯水中磁力搅拌5 min，同样将130 mg ~ 150 mg的铁氰化钾分散于20 mL超纯水中磁力搅拌5 min，然后将两种溶液混合继续在室温下搅拌8 h ~ 12 h，离心分离悬浮物，使用超纯水和乙醇分别洗涤2次，35 ℃真空干燥，得到土黄色纳米多孔NiFe MOFs；将30 mg ~ 50 mg纳米多孔NiFe MOFs分散在50 mL超纯水中，加入1 mL ~ 3 mL 1% ~ 3%的氯金酸溶液，室温下搅拌5 min，加入4 mg ~ 6 mg聚乙烯吡咯烷酮抑制金纳米粒子的团聚，然后加入70 mg ~ 90 mg还原剂柠檬酸三钠，0.5 mg ~ 1 mg硼氢化钠，室温下搅拌8 h ~ 12 h，溶液慢慢变成紫黑色，离心分离悬浮物，超纯水洗涤至上清液无色，35 ℃真空干燥12 h，得到紫黑色固体Au@NiFe MOFs；（4）Au@NiFe MOFs标记抗原孵化物溶液的制备将8 mg ~ 12 mg的Au@NiFe MOFs分散到1 mL pH = 7.5的PBS中，加入4 μL ~ 6 μL、6 mg/mL的抗原，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h ~ 24 h，4 ℃离心分离，加入1 mL 0.5% ~ 0.9%的牛血清白蛋白溶液，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化2 h封闭Au@NiFe MOFs上面的非特异性活性位点，4 ℃离心分离，最后分散于pH = 7.5的PBS缓冲溶液中，制得0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Au@NiFe MOFs标记抗原，储存于4 ℃中备用；（5）分别用1.0 mm、0.3 mm、0.05 mm的氧化铝抛光粉对直径4 mm的玻碳电极做抛光处理，用超纯水冲洗干净；（6）将6 µL 0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL Ru(bpy)32+/Zr‑MOFs标记偶联抗体滴涂至电极表面，4 ℃晾干；（7）将3 μL体积分数为1%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用pH = 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，4 ℃晾干；（8）将6 μL、一定浓度的待测物标准溶液滴加到电极表面，用pH = 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，4 ℃晾干（9）将6 μL、0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Au@NiFe MOFs标记待测物抗原孵化溶液滴加到电极表面，4 ℃晾干，用pH = 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，制得一种基于Au@NiFe MOFs的双猝灭竞争型电致化学发光免疫传感器。