[发明专利]UPLC法快速测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色

摘要

本发明一种UPLC法波长切换技术测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色物的方法，其包括如下步骤：(1)配制含有西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红的混合对照品溶液；(2)配制西红花供试品溶液；(3)上色谱柱；(4)采用UPLC定时波长自动切换技术，对不同时间段的组分测定不同波长下吸光值；(5)对待测样品中的西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红进行定性检测；(6)对待测样品中的西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ进行定量检测。本发明在活性成分含量测定的同时，更直观地判断样品中是否存在非法染色情况，避免了测定单个成分、逐步判断的繁琐步骤，准确灵敏、重复性好，且对仪器设备要求较低。采用该方法，能够更快速、全面有效的控制西红花质量，为企业产品生产所用的西红花原料质量控制提供方法依据。

主权项

1.一种UPLC法波长切换技术测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色物的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配制含有西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红的混合对照品溶液；(2)将待测样品配制成西红花供试品溶液；(3)取色谱柱，将步骤(1)所述混合对照品溶液和步骤(2)所述西红花供试品溶液分别上色谱柱，用洗脱液进行梯度洗脱；其中，所述洗脱液由流动相A和流动相B组成，流动相A为乙腈，流动相B为乙酸铵‑乙酸水溶液；梯度洗脱中流动相A在洗脱液中所占体积分数为：第0～3min，流动相A体积分数从10％匀速上升到37％；第3～9min，流动相A体积分数＝37％；第9～10min，流动相A体积分数从37％匀速下降到10％；(4)采用UPLC定时波长自动切换技术，对不同时间段的组分测定不同波长下的吸光值，所述0min是从步骤(3)中进样开始计时：第0～2.0min，在432nm波长下检测柠檬黄；第2.0～4.0min，在509nm波长下检测胭脂红；第4.0～5.3min，在440nm波长下检测西红花苷‑I和西红花苷‑Ⅱ；第5.3～6.5min，在550nm波长下检测新品红；第6.5～7.0min，在432nm波长下检测金胺O；第7.0～8.0min，在550nm波长下检测新品红；第8.0～8.7min，在432nm波长下检测金胺O；第8.7～10.0min，在550nm波长下检测新品红；(5)将西红花供试品溶液的谱图和混合对照品溶液的谱图进行比对，对待测样品中的西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红进行定性检测；(6)配制含有西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ的混合对照品，并稀释至系列质量浓度，然后按照步骤(3)和(4)的色谱条件上样测定，采用外标法进行定量。