[发明专利]先将片段进行融合然后转化构成载体的构建方法在审
| 申请号： | 201811586556.8 | 申请日： | 2018-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN109652446A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 米铁柱;张国栋;刘佳音;邹丹丹;徐春莹;罗碧;刘洋 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/65;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市李*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本申请公开了一种先将片段进行融合然后转化构成载体的构建方法，包括以下步骤：A、提取待转化作物DNA；B、分别获得多种连锁基因表达盒；C、获取去除Hpt基因的pCAMBIA1300质粒的；D、各个表达盒的连接；E、融合片段与pCAMBIA1300‑hpt‑质粒的连接。进一步包括：构建双T‑DNA载体，其中一个T‑DNA区含有三连锁基因，另一个T‑DNA区含有抗性基因，用于愈伤转化及植株再生阶段的筛选；所述三连锁基因分别为：DsRed基因、EAT1基因、ZmAA基因。本发明提供了一种基于DsRED荧光蛋白基因为报告基因的不含潮霉素抗性基因的工程菌株。本发明还提供了一种将片段进行融合，然后转化载体的一种实验新思路。 | ||
| 搜索关键词： | 连锁基因 构建 融合 表达盒 转化 质粒 基因 潮霉素抗性基因 报告基因 工程菌株 抗性基因 荧光蛋白 植株再生 转化载体 愈伤 去除 筛选 申请 | ||
【主权项】：
1.一种先将片段进行融合然后转化构成载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：A、提取待转化作物DNA；B、分别获得多种连锁基因表达盒；C、获取去除Hpt基因的pCAMBIA1300质粒的；D、各个表达盒的连接；E、融合片段与pCAMBIA1300‑hpt‑质粒的连接。
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