[发明专利]山羊传染性胸膜肺炎支原体单克隆抗体制备方法在审
| 申请号： | 201811586850.9 | 申请日： | 2018-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN110028580A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 文正常;王璇;潘淑惠;吴玙彤 | 申请（专利权）人： | 贵州省畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12;C12N15/06;G01N33/577;G01N33/569 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550005 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种山羊传染性胸膜肺炎支原体单克隆抗体制备方法，采用山羊传染性胸膜肺炎支原体RPS11基因重组蛋白纯化抗原，按照常规方法免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓细胞进行融合，经过3次亚克隆获得了3株杂交瘤细胞，分别为4E41E2、3G91C3、1B61E11,其亚型鉴定结果均为单一IgG1亚型。将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中制备腹水，收集腹水经过预处理后选用Protein G‑琼脂糖亲和层析柱纯化，经间接ELISA特异性抗体效价检测，结果显示小鼠腹水测定单克隆抗体的效价均高于104。Western blot试验表明，制备的单克隆抗体可以与RPS11基因重组纯化蛋白抗原发生特异性反应。 | ||
| 搜索关键词： | 单克隆抗体 山羊传染性胸膜肺炎 制备 支原体 杂交瘤细胞 腹水 抗原 免疫Balb/c小鼠 琼脂糖亲和层析 特异性抗体效价 预处理 重组蛋白纯化 特异性反应 间接ELISA 纯化蛋白 次亚克隆 骨髓细胞 小鼠腹腔 小鼠腹水 亚型鉴定 脾细胞 柱纯化 效价 接种 融合 检测 试验 | ||
【主权项】：
1.一种山羊传染性胸膜肺炎支原体单克隆抗体制备方法，其特征在于：采用山羊传染性胸膜肺炎支原体RPS11基因重组蛋白纯化抗原，按照常规方法免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓细胞进行融合，经亚克隆获得杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中制备腹水，收集腹水经过预处理后选用Protein G‑琼脂糖亲和层析柱纯化，经间接ELISA特异性抗体效价检测。
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