[发明专利]一种游离巯基的检测方法

摘要

本发明公开了一种游离巯基的检测方法，该检测方法包括以下步骤：1)反应液制备：先配制浓度为0.1mol/L的硫酸钠溶液，再加入EDTA得到浓度为1mmol/L的EDTA反应液；2)工作液制备：将Ellman试剂溶解于反应液中，配制浓度为10mmol/L的工作液；3)标准品溶液制备；4)取样供试；5)测定计算：将待测样品或标准品在412nm处测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算待测样品浓度。本发明的检测方法操作简单，成本低廉，样品量低，最多能同时检测91个样品，检测时间大大减少，仅需15min。

主权项

1.一种游离巯基的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)反应液制备：称取硫酸钠，加水溶解，摇匀后，加入氢氧化钠调节pH至8.0，再加水定容，得到浓度为0.1mol/L的硫酸钠溶液；称取EDTA并添加至至硫酸钠溶液中，混匀，得到浓度为1mmol/L的EDTA反应液；2)工作液制备：按照每0.004g Ellman试剂对应1mL反应液，将Ellman试剂溶解于步骤1)制备的反应液中，配制浓度为10mmol/L的工作液；3)标准品溶液制备：按照每13.17mg半胱氨酸盐酸盐对应50mL反应液，将半胱氨酸盐酸盐溶解于反应液中，制得浓度为1.5mM的标准品储备液，使用反应液梯度稀释得标准品溶液；4)取样供试：取待测样品或标准品25μL，加入酶标仪的酶标孔板中，每个孔中加入255μL反应体系，混合均匀后室温孵育15min，其中，反应体系由反应液与工作液按照体积比1:50混合均匀后得到；5)测定计算：将待测样品或标准品在412nm处测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，通过该标准曲线计算待测样品浓度。