[发明专利]一种原代肿瘤细胞分离培养方法在审
| 申请号： | 201811600354.4 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109609461A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 周振华;肖建如;贾奇;曹佳实;张薇薇;匡牧宇;龚德军;胡硕;李焱;王旭东 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学第二附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 龚敏 |
| 地址： | 200003 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种原代肿瘤细胞分离培养方法，包括如下步骤：将肿瘤标本去除肿瘤组织周围的坏死及非肿瘤组织，剪碎、消化，所得消化后组织经筛网过滤、离心后PBS重悬，再经离心，弃上层清液，得分离后的组织细胞；将分离后的组织细胞用原代细胞无血清培养基重悬得到重悬液，调整细胞密度，接种于原代细胞超低粘附培养皿中培养；每隔48小时，离心收集细胞后弃掉原有的原代细胞无血清培养基上清，再用原代细胞无血清培养基重悬换液，继续在原代细胞超低粘附培养皿中培养至1周以上，再经常规细胞培养方法培养得到高纯度的原代肿瘤细胞。本发明制备的细胞获得率高，纯化程度高，且对现有实验设备没有更高的要求，适宜在肿瘤研究领域广泛应用推广。 | ||
| 搜索关键词： | 原代细胞 无血清培养基 原代肿瘤细胞 重悬 培养皿 分离培养 肿瘤组织 组织细胞 粘附 细胞培养 离心收集细胞 细胞 消化 筛网过滤 上层清液 实验设备 肿瘤标本 肿瘤研究 高纯度 原有的 重悬液 坏死 换液 剪碎 去除 制备 接种 应用 | ||
【主权项】：
1.一种用于培养原代肿瘤细胞的原代细胞超低粘附培养皿，其特征在于，所述原代细胞超低粘附培养皿的铺制方法如下：a)将聚甲基丙烯酸2‑羟乙脂Poly‑HEMA溶解于纯乙醇中得到Poly‑HEMA胶，其中所述Poly‑HEMA胶中Poly‑HEMA的终浓度≥20mg/mL；b)将配置好的Poly‑HEMA胶覆盖于培养皿底部，吸干残余胶，放置于细胞培养超净台中紫外照射，吹风过夜至完全干燥，制备得到所述原代细胞超低粘附培养皿。
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