[发明专利]一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法

摘要

本发明涉及一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，以磷酸酯类载体替代固相树脂，在脱水偶联剂的作用下与保护甘氨酸(Fmoc‑Gly‑OH)的C‑端连接；借助磷酸酯类载体在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物与其他杂质分离，经过多肽偶联后采用侧链脱、剪除载体和谷胱甘肽的分离纯化得到谷胱甘肽结晶。与目前已有的合成方法相比，本发明兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备谷胱甘肽，而且磷酸酯类载体可以回收并直接再利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。

主权项

1.一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于步骤如下：步骤1、载体偶联：以磷酸酯类载体替代固相树脂，在脱水偶联剂的作用下与氨基酸在0～50℃下搅拌反应1～3小时，得到生成物A；所述氨基酸与磷酸酯类载体的摩尔比为1～3:1；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；所述氨基酸采用芴甲氧羰基(Fmoc)保护的甘氨酸(Fmoc‑Gly‑OH)，保护甘氨酸Fmoc‑Gly‑OH的C‑端连接；步骤2、分离纯化：向生成物A加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助磷酸酯类载体在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物A与其他杂质分离；对分离后的生成物A进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物A；步骤3、脱除N‑端Fmoc：将纯化的生成物A采用脱Fmoc试剂处理，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时得到生成物B；向生成物B加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助磷酸酯类载体在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物B与其他杂质分离；对分离后的生成物B进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物B；步骤4：重复步骤1～步骤3，所述氨基酸采用半胱氨酸[Fmoc‑Cys(Trt)‑OH]；再重复步骤1～步骤3，所述氨基酸采用γ‑谷氨酸[Fmoc‑Glu(OH)‑O^tBu]，依次偶联上侧链保护的半胱氨酸[Fmoc‑Cys(Trt)‑OH]和γ‑谷氨酸[Fmoc‑Glu(OH)‑O^tBu]，脱Fmoc后得到化合物F；步骤3脱Fmoc后得到化合物F为多肽偶联；步骤5、侧链脱保护：以三氟乙酸的有机溶液为侧链脱保护剂，反应条件为通氮气或氩气保护，‑5～30℃下，搅拌1～2小时，同时脱除侧链上的保护基团Trt和tBu，得到化合物G；所述三氟乙酸的有机溶液中三氟乙酸与溶剂的体积比为1:1～4；步骤6、剪除载体：将化合物G溶于溶剂中，以氢氧化锂的水溶液或钯‑碳催化加氢作为剪除反应试剂，反应条件为通氮气或氩气保护，15～40℃下，搅拌1～3小时；反应完毕后，旋蒸回收溶剂；合并有机相回收磷酸酯类载体：残留溶液以乙酸乙酯萃取并与水相分离，萃取时加入极性小的烷烃或醚类溶剂；所述加入氢氧化锂水溶液或钯‑碳催化加氢，氢氧化锂的加量为化合物G的2‑4倍当量；所述氢氧化锂水溶液的浓度为1～2M；步骤7、谷胱甘肽的分离纯化：将步骤6所得的水相溶液用稀盐酸中和，调节pH＝5‑6，沉淀析出，经过滤、重结晶、洗涤、干燥得到谷胱甘肽结晶H。