[发明专利]用于CRISPRi系统的质粒、其构建方法及其在使鼠疫菌目的基因定向沉默中的应用有效
| 申请号： | 201811601943.4 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109852627B | 公开（公告）日： | 2022-07-05 |
| 发明（设计）人： | 王桐;杜宗敏;杨瑞馥;宋亚军 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 鲁兵 |
| 地址： | 100071 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于CRISPRi系统的质粒、其构建方法及其在使鼠疫菌目的基因定向沉默中的应用，属于基因编辑技术领域，其中质粒包含sgRNA表达质粒和pdCas9‑tetO质粒，将本发明构建的双质粒CRISPRi系统转化入鼠疫耶尔森氏菌中在诱导剂脱水四环素盐酸盐存在下可使目的基因定向沉默。本发明的CRISPRi系统可以大幅度降低目的基因的转录水平与蛋白水平，并使鼠疫菌表现出缺失目的基因的相关表型，能作为在鼠疫菌中进行高通量基因功能研究的新型工具。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 crispri 系统 质粒 构建 方法 及其 鼠疫 目的 基因 定向 沉默 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一种用于CRISPRi系统的sgRNA表达质粒，其特征在于，所述sgRNA表达质粒包含合成片段pgtet，该合成片段pgtet替换pgRNA载体原有的PJ23119启动子；其中所述合成片段pgtet包含：PJ23119启动子、由PJ23119启动子启动表达的tetR基因和四环素启动子PLtetO‑1；其中所述四环素启动子PLtetO‑1含有两个tetO元件。
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