[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9系统构建致死基因全身性敲除小鼠模型的方法在审
| 申请号： | 201811603936.8 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109777837A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 卢静;仵毅;陈柏安;鲁飞翔 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京方安思达知识产权代理有限公司 11472 | 代理人： | 陈琳琳;武玥 |
| 地址： | 100054 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种利用CRISPR/Cas9系统构建致死基因全身性敲除小鼠模型的方法。本发明包括以下步骤：1)设计高效识别敲除后致死基因PAM区域的sgRNA序列；2)将Cas9的mRNA或蛋白和步骤1)设计的sgRNA混合，将混合物对小鼠二细胞胚胎中的任意一个卵裂球细胞显微注射，注射后胚胎移植，品系基因鉴定，得到致死基因敲除的嵌合体阳性首建鼠；3)阳性首建鼠与野生型鼠配种产生F1代，基因鉴定确认后最终得到致死基因全身性敲除的杂合子F1代鼠，完成可传代繁育的小鼠模型构建。本发明的技术方案与ES细胞基因打靶方式构建致死基因全身性敲除小鼠模型的现有技术相比，操作步骤简单，操作难度低，并且制作周期短，周期仅为4个月左右。 | ||
| 搜索关键词： | 致死基因 敲除小鼠 敲除 阳性首建鼠 基因鉴定 系统构建 传代 生物技术领域 小鼠模型构建 方式构建 高效识别 基因打靶 细胞胚胎 显微注射 野生型鼠 制作周期 胚胎移植 混合物 卵裂球 嵌合体 杂合子 小鼠 品系 蛋白 注射 繁育 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种利用CRISPR/Cas9系统构建致死基因全身性敲除小鼠模型的方法，包括以下步骤：1)设计高效识别致死基因PAM区域的sgRNA序列；2)将Cas9的mRNA或蛋白和步骤1)设计的sgRNA混合，将混合物对小鼠二细胞胚胎中的任意一个卵裂球细胞显微注射，注射后胚胎移植，品系基因鉴定，得到致死基因敲除的嵌合体阳性首建鼠；3)阳性首建鼠与野生型鼠配种产生F1代，基因鉴定确认后最终得到致死基因全身性敲除的杂合子F1代鼠，完成可传代繁育的小鼠模型构建。
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