[发明专利]一种液态奶中微生物总DNA的提取方法在审
| 申请号： | 201811616564.2 | 申请日： | 2018-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN109504677A | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 李松励;李明;王加启;郑楠;赵圣国 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京细软智谷知识产权代理有限责任公司 11471 | 代理人： | 付登云 |
| 地址： | 100089 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种液态奶中微生物总DNA的提取方法，所述提取方法包括细胞裂解过程、DNA纯化过程、DNA回收过程和溶解DNA等过程。本发明的有益效果：所述的液态奶中微生物总DNA的提取方法，具有耗时短，步骤少，无裂解液浪费，提取的DNA质量比传统方法更纯，质量更高，提取的DNA量比传统方法更大。 | ||
| 搜索关键词： | 微生物总DNA 液态奶 细胞裂解 裂解液 质量比 耗时 溶解 | ||
【主权项】：
1.一种液态奶中微生物总DNA的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：(1)样品处理：室温均质牛奶样品，取1.0mL牛奶样品进行离心，弃掉上清液，得到沉淀物；(2)细胞裂解：在步骤(1)得到的所述沉淀物中加入Enzymatic Lysis buffer和lysozyme混匀后孵育，得到裂解液；(3)纯化DNA：在步骤(2)得到的所述裂解液中加入酚氯仿进行抽提，旋涡振荡，直至白色悬浊液出现，室温孵育5min，然后离心取上清液；(4)回收DNA：在步骤(3)得到的所述上清液中加入Glycogen、醋酸钠和异丙醇，混匀，‑20℃孵育30min，离心弃掉上清液，并同时保留沉淀；(5)溶解DNA：在步骤(4)得到的所述沉淀中加入75％无水乙醇进行洗涤，弃掉上清液，将沉淀室温晾干3‑5min；加入20μL TE buffer或者ddH2O，室温孵育8‑10min后，轻弹混匀或者轻微涡旋混匀，即可获得检测样品。
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