[发明专利]一种利用金属有机框架材料制备酶标记抗体的方法

摘要

本发明公开了一种利用金属有机框架材料制备酶标记抗体的方法，首先利用金属有机框架材料PCN‑333上的羧基与EDC和sulfo‑NHS发生反应，使PCN‑333功能化，再加入抗体，抗体上的氨基与功能化的PCN‑333发生酰基化反应生成稳定的酰胺键，即抗体被固定到PCN‑333的表面，最后将酶封装到PCN‑333中，形成酶标记抗体复合物。本发明通过抗体与MOFs的偶联反应，避免了繁琐且低效率的酶和蛋白(抗体)的化学交联，通过简单的离心即可使制备的复合物与多余的抗体或者酶分离，避免了繁琐的分离与纯化步骤，如凝胶过滤、长时间透析等，进而保证了酶和抗体的活性不受损失，改变了传统意义上抗体与酶的偶联过程，不仅简化了酶标抗体的过程，而且提高了酶标量，大大地降低了制备酶标记抗体的成本。

主权项

1.一种利用金属有机框架材料制备酶标记抗体的方法，其特征在于：(1)合成PCN‑333将2,4,6‑三(4‑羧基苯基)‑1,3,5‑三嗪与六水合三氯化铝按质量比为1:2～4加入N,N‑二乙基甲酰胺中或将2,4,6‑三(4‑羧基苯基)‑1,3,5‑三嗪与三氯化铁按质量比为1:0.6～1.5加入N,N‑二乙基甲酰胺中，并加入聚乙烯吡咯烷酮，超声至固体完全溶解，然后加入三氟乙酸，混合均匀，所得混合液在100～130℃下加热搅拌17～24h，反应完后离心分离，固体经洗涤、干燥，得到粒径为250～300nm的PCN‑333；(2)功能化PCN‑333将PCN‑333、N‑(3‑二甲氨基丙基)‑N'‑乙基碳二亚胺盐酸盐、N‑羟基硫代琥珀酰亚胺按质量比为1:4～22.5:8～50加入超纯水中，常温振荡反应30～40min后，用超纯水将固体离心洗涤，得到功能化PCN‑333；(3)合成酶标抗体复合物将功能化的PCN‑333加入pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中，再加入抗体，常温振荡孵育30～40min后，在4℃下孵育10～15h，用PBS离心洗涤收集固体；所得固体分散于pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中，再加入酶，振荡孵育后，离心收集固体，用封闭液封闭后，分散于含牛血清白蛋白的稀释液中，得到酶标抗体复合物，于4℃下储存；上述功能化的PCN‑333与抗体、酶的质量比为1:0.1～0.3:0.01～0.2。