[发明专利]一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞扩增的方法

摘要

本发明的目的是提供一种新型灭活重组K562细胞联合细胞因子组合刺激NK细胞扩增的方法。本发明制备得到的NK细胞，具有很高的纯度和杀伤活性，经检测培养至14天时，NK细胞纯度达90％以上；当效靶比为10:1时，NK细胞对K562细胞的杀伤活性为80％以上。本发明制备的NK细胞增殖速度快，培养至14‑17天细胞扩增倍数达500以上，本发明制备的NK细胞有很好的靶向杀伤肿瘤细胞的效果。

主权项

1.一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞扩增的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：1)配制次氯酸液用DPBS溶液将次氯酸钠溶液配制成浓度为60mM的次氯酸储存液；2)然后将次氯酸储存液加入到重组K562细胞中，吹打混匀，3)将细胞悬浮液放入37℃，5％CO2的二氧化碳培养箱中培养1小时，期间每30min吹打混匀一次，诱导饲养细胞氧化死亡；4)1小时以后，100g，5min离心收集细胞，用DPBS洗涤，培养基重悬制成灭活重组K562细胞；5)将分离的人外周血单核细胞用培养基重悬，按1:1的比例加入灭活重组K562细胞，10％的自体血浆，添加细胞因子组合IL‑2、CD16mAb和CD3mAb；PBMC的接种浓度范围为1x106cells/ml‑1.5x106cells/ml，放37℃，5％CO2培养箱中培养至第三天，补加添加了IL‑2的新鲜培养基；6)培养期间每隔2或3天补加新添加了IL‑2的新鲜培养基，维持细胞浓度在5x105cells/ml以上，在培养的第14天，离心收集全部培养所得细胞。