[发明专利]一种从脐带中获得间充质干细胞的方法在审
申请号: | 201811638486.6 | 申请日: | 2018-12-29 |
公开(公告)号: | CN109468273A | 公开(公告)日: | 2019-03-15 |
发明(设计)人: | 林雨国;周亚楠 | 申请(专利权)人: | 厦门博瑞思生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人: | 秦华 |
地址: | 361000 福建省厦门市海沧区翁角*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | 本发明公开了一种从脐带中获得间充质干细胞的方法。包括,脐带洗涤后用安尔碘和/或75%酒精消毒:再去除血管、分离华通氏胶;铺板培养;换液培养并第14d或细胞汇合度达到45‑55%收获:消化过滤。本发明所述方法可更加快速的获得原代间充质干细胞(<15day),操作更加简便,相同量组织块下获得的原代间充质干细胞数量更多,且能够有效的避免污染,无需在后续的培养中加入抗生素来防止细胞污染。 | ||
搜索关键词: | 间充质干细胞 脐带 避免污染 酒精消毒 细胞汇合 细胞污染 铺板 组织块 换液 去除 抗生素 洗涤 过滤 血管 消化 收获 | ||
【主权项】:
1.一种从脐带中获得间充质干细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤,脐带的洗涤与消毒:将健康的脐带进行洗涤后再使其浸没到安尔碘或75%酒精中进行消毒,消毒时间不得超过30s,加入清洗液清洗1‑2遍;或者,将健康的脐带进行洗涤后再使其浸没到安尔碘或75%酒精中进行消毒,消毒时间不得超过30s,加入清洗液清洗1‑2遍后,再使其浸没到75%酒精或安尔碘中进行消毒,每次消毒时间不得超过30s;再加入清洗液清洗1‑2遍;去除血管、分离华通氏胶:去掉脐带的头尾后,将剩余的脐带剪成1‑3cm段;优选的,将剩余的脐带剪成1.5‑2.5cm段;更优选的,将剩余的脐带剪成2cm段;用齿镊剥开外表皮,剔除静脉和动脉血管,剥离其中的华通氏胶,将华通氏胶用清洗液清洗;铺板培养:华通氏胶中加入无血清培养基,使其刚好浸没华通氏胶,用剪刀将华通氏胶剪碎至0.1‑1mm3;添加无血清培养基使剪碎的组织块重悬,再转移组织块到培养瓶中,并补加无血清培养基;使组织块平均分布在培养瓶上,并使培养基润湿整个瓶底,做好标记,放入培养箱内培养,6‑8d内,优选的,7d内不得移动;培养箱培养;优选的,培养条件为37度5%CO2饱和湿度培养;换液培养并收获:7d后在每个培养瓶内补加培养基,第10d换液,吸去原培养基,每瓶加入新鲜培养基25mL,继续培养;第14d时或细胞汇合度达到45‑55%;优选的,达到50%即可收获;消化过滤:弃去原培养基,加入生理盐水清洗后加入含EDTA的胰酶孵育,待细胞变圆脱落时再加入胰酶终止液进行细胞收集,收集的细胞进行离心,弃去上清,用生理盐水重悬细胞后过70um细胞筛过滤除去组织块,再次离心去掉上清。
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