[发明专利]一种苔藓植物外植体的消毒方法

摘要

本发明公开了一种杀菌效果好、消毒废液不污染环境且对人体无害、毒性小、不易损伤苔藓植物的苔藓植物外植体的消毒方法。该消毒方法通过对苔藓外植体清洗后，接着将外植体依次经过酒精、次氯酸钠、酒精、次氯酸钠浸泡消毒处理，然后利用无菌水清洗干净后放入培养皿中，培养14‑21天至培养基表面形成原丝体和茎叶体，剪取培养基表面形成的原丝体和茎叶体，并依次经过酒精、次氯酸钠、酒精、次氯酸钠浸泡消毒处理，最后再利用无菌水清洗干净后即可得到无菌的苔藓外植体，该消毒方法操作简单、所需外植体量少、操作门槛低、不使用高污染消毒剂、对环境无害，试验效果好。适合在植物组织培养技术领域推广应用。

主权项

1.一种苔藓植物外植体的消毒方法，其特征在于包括以下步骤：A、苔藓植物外植体的选取：挑选健壮的、生长旺盛的外植体，将外植体的假根部分切除后，放入流水中冲洗时间为3‑8min；B、将经过步骤A处理过后的外植体放入超声波震荡仪中清洗1‑2h；C、将经过步骤B处理过后的外植体浸泡在浓度为500mg/l的氨苄青霉素钠溶液中，并且在避光条件下恒温浸泡1‑2h，所述氨苄青霉素钠溶液的温度为3.5‑4.5度；D、将经过步骤C处理过后的外植体依次经过如下浸泡处理：首先，放入浓度为75％酒精中浸泡一段时间后，利用无菌水清洗一段时间后接着放入浓度为1％的次氯酸钠溶液中浸泡一段时间，利用无菌水清洗一段时间后再放入浓度为75％酒精中浸泡一段时间，利用无菌水清洗一段时间后再放入浓度为1％的次氯酸钠溶液中浸泡一段时间，最后再利用无菌水清洗干净备用；E、将经过步骤D处理过后的外植体放入培养皿中，培养皿底部装有无菌过滤棉，并在培养皿中加入营养液，加入的营养液量将培养皿底部放置的无菌过滤棉完全湿润即可，所述营养液由6‑BA、氨苄青霉素钠、knop无机培养液组成，其中6‑BA的浓度为0.1mg/L，氨苄青霉素钠的浓度为500mg/L；F、将培养皿置于培养箱中培养14‑21天至培养基表面形成原丝体和茎叶体，培养箱的温度为23‑25度；每天24d中在黑暗中培养的时间为6‑10小时，其余时间为光照下培养；G、剪取培养基表面形成的原丝体和茎叶体，并依次经过如下浸泡处理：首先，放入浓度为75％酒精中浸泡一段时间，利用无菌水清洗一段时间后接着放入浓度为1％的次氯酸钠溶液中浸泡一段时间，利用无菌水清洗一段时间后再放入浓度为75％酒精中浸泡一段时间，利用无菌水清洗一段时间后再放入浓度为1％的次氯酸钠溶液中浸泡一段时间，最后再利用无菌水清洗干净后即可得到无菌的苔藓外植体。