[发明专利]一种基于CD47/SIRPα阻断功能及其生物效应的药物快速筛选方法

摘要

本发明建立了一种基于CD47/SIRPα阻断功能及其生物效应的药物快速筛选方法：将红色荧光蛋白RFP偶联于CD47蛋白羧基未端(C端)；青色荧光蛋白基因CyPet构建在SIRPα蛋白的下游，以及黄色荧光蛋白基因Ypet通过一个连接肽(G4S)3构建在PTPN11基因的下游，分别构建真核表达载体，并获得新型的稳转细胞系SIRPαCyPet.SH2PTPN11Ypet/THP‑1，以CD47‑RFP与细胞系的亲和进行荧光检测筛选阻断剂。本方法可精确反映抗SIRPα和抗CD47药的效应，可同时获得阻断功能与CD47/SIRPα信号通路的生物学效应数据，构建快速筛选抗CD47/SIRPα药物和评估其生物学效应的实验模型。

主权项

1.一种基于CD47/SIRP α阻断功能及其生物效应的药物快速筛选方法，包括以下步骤：1)将第一荧光蛋白与CD47蛋白羧基末端连接构建重组CD47‑第一荧光蛋白融合蛋白；2)将第二荧光蛋白与构建在SIRP α蛋白的下游；将第三荧光蛋白基因构建在PTPN11基因SH2结构域的下游；在CMV启动子下分别连接SIRP α‑第二荧光蛋白和SH2PTPN11‑第三荧光蛋白基因片段，构建表达质粒；3)将CMV‑SIRP α‑第二荧光蛋白和CMV‑8H2PTPN11‑第三荧光蛋白的基因共转染到单核细胞系中，建立稳转细胞系；4)稳转细胞系诱导成巨噬细胞后与抗SIRP α或抗CD47的单抗药、小分子、或多肽阻断剂等新药孵育，清洗非特异性结合后与重组CD47‑第一荧光蛋白融合蛋白共孵育；5)分别检测第一、第二、第三荧光蛋白荧光值，并判断新药对CD47/SIRP α信号通路的阻断功能。