[发明专利]一种快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法在审
| 申请号： | 201910032214.X | 申请日： | 2019-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN109628482A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 徐秉良;李世娟;李隆;姚军胜 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/06;A01H6/32 |
| 代理公司： | 张家界市慧诚商标专利事务所 43209 | 代理人： | 高红旺 |
| 地址： | 730070 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明提供一种快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，包括：（1）将无菌的落地生根外植体用野生型和含有GUS报告基因A4农杆菌侵染液侵染；（2）侵染后的外植体置于无抗MS固体培养基上，黑暗条件下进行共培养，再在有抗MS固体培养基中进行共培养；(3)在有抗MS固体培养基上进行筛选培养，（4）在有抗MS固体培养基上进行继代培养；（5）在MS液体培养基上进行扩大培养；(6)对含有GUS报告基因的毛状根进行GUS染色探究转化效率。本发明方法适用于多种落地生根品种毛状根的诱导，具有取材方便、适用性强、操作简便、诱导速度快、遗传稳定及节约成本等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 落地生根 毛状根诱导 毛状根 扩繁 侵染 诱导 黑暗条件 继代培养 扩大培养 筛选培养 遗传稳定 转化效率 外植体 野生型 染液 无菌 取材 节约 | ||
【主权项】：
1.一种快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将无菌的2‑3周龄的落地生根外植体分别用侵染液A和侵染液B侵染处理5‑10分钟，所述的侵染液A为野生型A4发根农杆菌，侵染液B为转入GUS报告基因的A4发根农杆菌；（2）将侵染后的外植体置于无抗MS固体培养基上，黑暗条件下进行共培养24‑48小时；（3）将外植体转移到有抗MS固体培养基中进行共培养，2‑3周以后外植体分化形成毛状根；（4）剪下毛状根，在有抗MS固体培养基上进行筛选培养，两周以后筛选出生长速度快的落地生根毛状根；（5）再在有抗MS固体培养基上进行继代培养，得到脱毒的落地生根毛状根；（6）剪取毛状根，在MS液体培养基上进行扩大培养，得到大量的落地生根毛状根；（7）用B侵染液诱导出的落地生根毛状根进行GUS染色探究转化效率。
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