[发明专利]一种用于制备抗EGFR全人源化单克隆抗体的细胞株构建方法在审
| 申请号： | 201910035505.4 | 申请日： | 2019-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN109988751A | 公开（公告）日： | 2019-07-09 |
| 发明（设计）人： | 李明丽;李明轩;尹春光;魏衍刚 | 申请（专利权）人： | 济宁学院 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20 |
| 代理公司： | 北京太兆天元知识产权代理有限责任公司 11108 | 代理人： | 王宇 |
| 地址： | 272001 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于制备抗EGFR全人源化单克隆抗体的细胞株构建方法，在中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株CHO/DHFR‑的细胞完成转染步骤后的POOL筛选步骤中，第一阶段利用不含HT的SFM4CHO培养基对整合重链基因的细胞株进行筛选，同时利用培养基中的Blasticidin筛选出整合有轻链基因的细胞株；第二阶段加入MTX以增加整合进细胞株基因组的轻、重链基因拷贝数以提高表达量。首次克隆筛选出适合大试生产工艺的表达量达2.0g/L‑3.0g/L的高效稳定细胞株，产品SEC、pI‑cIEF、脱糖分子量、基于细胞的抗体活性显著提升，为重组抗EGFR人源化单克隆抗体在国内实现产业化提供可能。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞株 整合 单克隆抗体 重链基因 培养基 表达量 筛选 构建 源化 制备 人源化单克隆抗体 中国仓鼠卵巢细胞 二氢叶酸还原酶 稳定细胞株 细胞 抗体活性 克隆筛选 轻链基因 产业化 基因组 拷贝数 脱糖 转染 生产工艺 | ||
【主权项】：
1.一种用于制备抗EGFR全人源化单克隆抗体的细胞株构建方法，其特征在于，在中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株CHO/DHFR‑的细胞完成转染步骤后的POOL筛选步骤中，第一阶段利用不含HT的SFM4CHO培养基对整合重链基因的细胞株进行筛选，同时利用培养基中的Blasticidin筛选出整合有轻链基因的细胞株；第二阶段加入MTX以增加整合进细胞株基因组的轻、重链基因拷贝数以提高表达量。
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