[发明专利]一种采用多重PCR法鉴定日本血吸虫尾蚴性别的方法在审
| 申请号： | 201910036428.4 | 申请日： | 2019-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN109536623A | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 许静;段中良;李春香;王小莉;刘磊;夏超明 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 殷海霞 |
| 地址： | 215000 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种采用多重PCR法鉴定日本血吸虫尾蚴性别的方法，属于生物检测技术领域。本发明依据日本血吸虫二性染色体Z染色体设计一对引物，再从W染色体中雌性序列特征性扩增区域设计引物一对，构建多重PCR体系，该体系可同时鉴定雌性和雄性尾蚴。本发明多重PCR法鉴定尾蚴性别的全过程约耗时4h，较已有报道大幅缩短了尾蚴性别鉴定时间。一方面节约了建立感染日本血吸虫动物模型的时间，另一方面可以依据尾蚴的性别，更加准确地建立所需要的实验动物模型。 | ||
| 搜索关键词： | 多重PCR 尾蚴 日本血吸虫尾蚴 日本血吸虫 性染色体 设计一对引物 生物检测技术 实验动物模型 动物模型 区域设计 性别鉴定 序列特征 构建 扩增 引物 耗时 感染 节约 | ||
【主权项】：
1.一种采用多重PCR法鉴定日本血吸虫尾蚴性别的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)日本血吸虫尾蚴样本选取：每只钉螺逸出的日本血吸虫尾蚴挑取3～5份样本，每份样本中日本血吸虫尾蚴的条数分别设置为1～10条；(2)DNA提取：对步骤(1)选取的样本进行DNA提取，得到日本血吸虫尾蚴DNA模板；(3)日本血吸虫尾蚴性别鉴定：采用多重PCR检测试剂对步骤(2)得到的日本血吸虫尾蚴DNA模板进行PCR反应，鉴定日本血吸虫尾蚴性别；其中，多重PCR检测试剂包括：日本血吸虫特异性引物，上下游引物分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：上游引物Pm0F：5’‑GGTGAAACATCATAAGACTAGAATT‑3’；下游引物Pm8R：5’‑GCGCTTTCTGTGTACCAAAACTTAG‑3’；雌性日本血吸虫特异性引物，上下游引物分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示：上游引物Pf5F：5’‑CTCAGTGTGTAACATGCGTACTT‑3’；下游引物Pf8R：5’‑TCGCTTTCTGTGTACTAAAACTTAA‑3’。
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