[发明专利]一种软骨细胞体外扩增方法在审
| 申请号： | 201910036568.1 | 申请日： | 2019-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN110016461A | 公开（公告）日： | 2019-07-16 |
| 发明（设计）人： | 段莉;王大平;李兴福;徐晓;陆伟;熊建义 | 申请（专利权）人： | 深圳市第二人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京康思博达知识产权代理事务所(普通合伙) 11426 | 代理人： | 马营营;刘冬梅 |
| 地址： | 518035 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种软骨细胞体外扩增方法，所述方法包括细胞原代培养和细胞传代培养，其中，在原代培养基中加入bFGF和PDGF等生长因子促进原代细胞培养，在传代培养基中加入具有相互协同作用的具有相互协同作用的bFGF、PDGF和IGF‑I等生长因子促进传代细胞培养，这样，不仅促进细胞数量扩增，同时可以有效避免细胞肥大化；同时，原代采用二维培养使软骨细胞适宜扩增，并优选传代采用三维培养以恢复退变的软骨组织表型，这样，在达到扩增软骨细胞数目的时，又能保持正常组织表型。 | ||
| 搜索关键词： | 扩增 传代 软骨细胞 生长因子 软骨 表型 外扩 细胞原代培养 原代细胞培养 原代培养基 细胞 传代细胞 软骨组织 三维培养 细胞传代 正常组织 培养基 二维 肥大 退变 优选 恢复 | ||
【主权项】：
1.一种软骨细胞体外扩增方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1、对软骨进行处理，得到软骨细胞；步骤2、将软骨细胞接种至培养基中进行细胞原代培养；步骤3、待步骤1中软骨细胞生长至70～80％汇合后进行细胞传代培养；其中，在步骤2中，所述培养基选自BME培养液、MEM培养液、HAM培养液或DMEM培养液，优选为DMEM培养液，更优选地，在所述培养基中含有：5～20％的血清、20～40ng/mL bFGF和20～40ng/mL PDGF；在步骤3中，进行细胞传代培养的培养基选自BME培养液、MEM培养液、HAM培养液或DMEM培养液，更优选地，在所述培养基中含有：5～20％的血清、20～40ng/mL bFGF、20～40ng/mL PDGF、1～10ng/mL IGF‑I。
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