[发明专利]一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法

摘要

本发明公开了一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为伊马替尼的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为10～5000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中伊马替尼的浓度。

主权项

1.一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，其特征在于：血浆样品经预处理后经高效液相色谱‑串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：(1)血浆样品预处理：血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以伊马替尼‑d8为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5uL的2ng/uL的内标伊马替尼‑d8溶液，混匀后加入1000uL的混合有机溶剂Ⅰ，混合有机溶剂Ⅰ为乙腈：甲酸按照体积比99：1混合得到的混合物，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液20uL至装有1000uL混合有机溶剂Ⅱ的96深孔板中，混合有机溶剂Ⅱ为甲醇：水：甲酸：1mol/L的醋酸铵按照体积比85：15：0.3：0.5混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；(2)试样测定：取10uL测试样品注入高效液相色谱‑串联质谱仪中，检测样品中伊马替尼和内标伊马替尼‑d8的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的伊马替尼浓度；(3)液相色谱测定，条件为：色谱柱：RestekAllure PFPP，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸/1mol/L的醋酸铵的体积比为100/0.3/0.5；流动相B：乙腈/水/甲酸/1mol/L的醋酸铵的体积比为98/2/0.3/0.5；洗液：甲醇/甲酸的体积比为99/1；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间4min；(4)质谱测定，条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为4000V，雾化温度为500℃，喷雾气压力为15Psi，辅助加热气压力为15Psi，气帘气压力为35Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为50eV的伊马替尼和伊马替尼‑d8；碰撞室入口电压分别为8eV的伊马替尼和伊马替尼‑d8；碰撞电压分别为35eV的伊马替尼和伊马替尼‑d8；碰撞室出口电压分别为20eV的伊马替尼和伊马替尼‑d8；正离子方式检测；扫描方式为多反应监测MRM；用于定量分析的离子反应分别为：m/z494.3→m/z394.0，其为伊马替尼；和m/z502.3→m/z393.5，其为伊马替尼‑d8。