[发明专利]一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法

摘要

本发明公开了一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为吡嗪酰胺的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.1～20μg/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中吡嗪酰胺的浓度。

主权项

1.一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法，其特征在于：血浆样品经预处理后经高效液相色谱‑串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：(1)血浆样品预处理：以K₂EDTA为抗凝剂，以吡嗪酰胺‑d3为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积比为1：1的乙腈水溶液，混匀后加入5uL的0.01ug/uL的内标吡嗪酰胺‑d3溶液，混匀后加入1000uL乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液50uL至装有1000uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为水：甲醇：甲酸按照体积比95：5：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；(2)试样测定：取10uL测试样品注入高效液相色谱‑串联质谱仪中，检测样品中吡嗪酰胺和内标吡嗪酰胺‑d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的吡嗪酰胺浓度；(3)液相色谱条件：色谱柱：Synergi^TM4umPolar‑RP80A，柱规格为50×2mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积比为100/0.1；流动相B：甲醇/甲酸的体积比为100/0.1；洗液：乙腈/水的体积比为50/50；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min；(4)质谱条件：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为4500V，雾化温度为450℃，喷雾气压力为30Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为20eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺‑d3；碰撞室入口电压分别为13eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺‑d3；碰撞电压分别为25eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺‑d3；碰撞室出口电压分别为8eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺‑d3；正离子方式检测；扫描方式为多反应监测MRM；用于定量分析的离子反应分别为：m/z124.0→m/z80.8，其为吡嗪酰胺；和m/z127.0→m/z83.7，其为吡嗪酰胺‑d3。