[发明专利]拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法在审
| 申请号： | 201910049124.1 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109706170A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 王超;宋文路;杜昕昕;尹春光;杜秋丽;常彦红;薛丽萍 | 申请（专利权）人： | 济宁学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/113;C12N15/10 |
| 代理公司： | 青岛发思特专利商标代理有限公司 37212 | 代理人： | 蔡绍强 |
| 地址： | 272001 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明是一种拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法，以拟南芥Col‑01周大的植株为材料，采用CTAB法提取其基因组DNA(gDNA)，设计特异性引物(F和R)扩增FIPV基因启动子，以提取的gDNA为模板，设计的F和R为特异性引物，进行PCR反应再经过酶切，与Gateway兼容的载体pENTR 3C进行连接，构建克隆载体pENTR FIPV‑Promoter，然后将pENTR FIPV‑Promoter与包含GUS报告基因的载体pMDC162进行LR反应，得到FIPV‑Promoter融合GUS的表达载体pMDC FIPV‑Promoter‑GUS。 | ||
| 搜索关键词： | 表达载体 拟南芥 构建 特异性引物 启动子 融合 基因启动子 基因组DNA 克隆载体 植株 扩增 酶切 兼容 | ||
【主权项】：
1.一种拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法，包括拟南芥FIPV基因启动子的DNA序列如序列表中拟南芥Col‑0FIPV基因启动子序列，其特征在于，拟南芥FIPV基因启动子的克隆方法如下：1)以拟南芥Col‑01周大的植株为材料，采用CTAB法提取其gDNA，设计特异性引物(F和R)扩增FIPV基因启动子：F(正向引物)：5’‑CGGGGTACCATTCTTCGGTTTTCCGGT‑3’；R(反向引物)：5’‑CCGCTCGAGACCGGAAAACCGAAGAAT‑3’；2)以提取的gDNA为模板，设计的F和R为引物，进行PCR反应，产物凝胶回收后通过酶切连接入Gateway兼容的载体pENTR3C，构建克隆载体pENTR FIPV‑Promoter，然后将pENTR FIPV‑Promoter与包含GUS报告基因的载体pMDC162进行LR反应，得到包含FIPV‑Promoter融合GUS的表达载体pMDC FIPV‑Promoter‑GUS，该表达载体转化感受态大肠杆菌DH5α，对pMDC FIPV‑Promoter‑GUS序列测定后得到拟南芥FIPV基因启动子序列所示:![]()
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