[发明专利]一种用于检测犬支原体的实时荧光定量PCR方法在审
| 申请号： | 201910051367.9 | 申请日： | 2019-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN109777880A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 彭秀丽;尹勋;王文靖;阳汶龙 | 申请（专利权）人： | 彭秀丽;尹勋;王文靖;阳汶龙 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/35 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430070 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种检测犬支原体的特异引物及实时荧光定量PCR检测方法，属于生物技术领域。本发明根据Genebank公布的犬支原体唾液酸酶基因保守区序列设计特异引物，扩增目的片段，将其连接到pMD‑18T载体，构建重组标准质粒，将其进行10倍倍比稀释，Ct值与拷贝数之间呈良好的线性关系，相关系数为0.9947。该方法灵敏度高，最低检出限为1.85×104拷贝/μL，比普通PCR检测灵敏度提高100倍；特异性好，对常见的3种支原体以及犬常见病原体均无特异扩增曲线；重复稳定性好，组间及组内变异系数均小于0.5％。该方法克服了传统分离培养鉴定时间长、血清学方法易产生交叉反应及常规PCR假阳性的缺陷，可用于犬支原体的早期诊断和检测，对犬支原体病的防控具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 支原体 实时荧光定量PCR 特异引物 灵敏度 检测 生物技术领域 唾液酸酶基因 重组标准质粒 保守区序列 倍比稀释 变异系数 分离培养 交叉反应 目的片段 特异扩增 线性关系 早期诊断 支原体病 重要意义 常规PCR 病原体 假阳性 检出限 拷贝数 血清学 种检测 构建 拷贝 可用 扩增 重复 | ||
【主权项】：
1.一种实时荧光定量PCR检测犬支原体的特异引物，其特征在于：所述上游引物的序列为：5′‑AAATCGAACTCGAGGACAACAAT‑3′，所述下游引物的序列为：5′‑AGCATCAAAAACAACTTCCTTGC‑3′。
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