[发明专利]一种基于选择性消除野生链背景干扰的基因突变检测方法

摘要

本发明公开了一种基于选择性消除野生链背景干扰的基因突变检测方法。通过PCR对待测目标序列进行扩增，并通过Lambda核酸外切酶处理成单链DNA；设计并合成与野生型DNA序列目标区域互补的硫代DNA链以及与非目标区域互补的RNA封闭链，与单链DNA混合并升温退火后加入DNase I进行切割；DNase I在硫代DNA链的引导下选择性地切除野生型DNA链目标区域序列，突变型DNA链由于目标区域内存在错配不能被DNase I切除而得以保留，从而显著提升突变型DNA链的丰度，大幅度降低了目前已有技术检测低丰度基因突变的难度。本发明方法无需复杂昂贵的仪器，容易操作，成本低，1天之内即可给出结果，可为临床肿瘤早筛和术后复发监测提供及时、可靠的基因突变信息。

主权项

1.一种基因突变检测方法，包括以下步骤：1)确定基因组DNA待测目标序列，该目标序列包括目标区域和非目标区域，设计并合成与野生型DNA序列目标区域互补的硫代DNA链以及与非目标区域互补的RNA封闭链；2)对待测目标序列进行PCR扩增，利用Lambda核酸外切酶将扩增产物处理成单链；3)将步骤2)得到的单链DNA与步骤1)合成的硫代DNA链和RNA封闭链在DNase I缓冲溶液中混合，升温退火后加入DNase I反应一段时间，热失活DNase I；4)对步骤3)酶切产物进行测序检测。