[发明专利]一种小鼠肠上皮隐窝细胞系及其构建与培养方法

摘要

本发明属于分子与细胞生物技术领域，具体涉及一种小鼠小肠上皮隐窝细胞系的构建方法，该方法通过通过特殊分离方法制成隐窝上皮细胞单细胞悬液，贴壁后采用进行永生化。这一细胞系良好地保持了肠上皮原代细胞的形态，具有旺盛的增殖能力。其在三维培养条件下可以形成特征性的类器官结构，特异性染色表明组成这一结构的细胞包括多种肠上皮分化子代。建系后的隐窝细胞仍然只能在原代培养条件下才能生长，其可应用于建立小鼠小肠上皮体外多维研究模型，用于研究肠道生理功能以及包括感染、癌症发生等在内的病理机制，同时为包括肠癌在内的肠道疾病的治疗靶点和药物筛选与评价提供了工具和平台。

主权项

1.一种小鼠肠上皮隐窝细胞系的构建方法，其特征在于，所述构建方法依次采用缓冲液I和缓冲液II分离除去非隐窝上皮得到隐窝细胞；然后将隐窝细胞用含有SV40TAg表达元件和piggyBac转座酶剪切位点的质粒载体转染，再用表达piggyBac 转座酶的腺病毒感染得到永生化隐窝细胞；采用ENR培养基培养永生化隐窝细胞，筛选，传代得到肠上皮隐窝细胞系；所述缓冲液I为EDTA的磷酸缓冲盐溶液，所述缓冲液II是D‑山梨醇和蔗糖的磷酸缓冲盐溶液。