[发明专利]一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法

摘要

本发明涉及一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，其包括下述步骤：(1)选择外植体；(2)对外植体进行预处理；(3)切取及阴干外植体；(4)对外植体进行两次消毒；(5)完成消毒后切体及栽培。根据本发明的国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，适用于所有的国兰品种，其在降低污染率和褐化率的同时，能大幅提高植体的成活率，具有较强的推广应用前景并且能产生较高的经济效益。

主权项

1.一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，其包括下述步骤：(1).选择外植体：选择为成株三分之一大小，已展开二至三叶的新芽作为外植体；(2).对外植体进行切取前预处理：首先，将待切取的所述外植体的植株置于遮光率为75％、湿度为60％‑80％的消毒温室环境中隔离，并将新芽的假鳞茎下方5cm基质清除，使其裸露，在隔离期间，每日向所述外植体的植株整体喷洒1‑2次1000倍广谱杀菌剂，并不对其进行浇水，控水一至两周的时间；(3).切取及阴干外植体；将前一步骤中预处理过的待切取的所述外植体的植株脱盆，彻底露出芽体，紧贴假鳞茎基部将芽体垂直切下并保证芽体的完整性，之后剥除芽体外部鳞片状苞叶，切除肉质根，削去假鳞茎基部黑褐色的老旧组织，剪切芽体的上部的叶片，保留叶片为原长度的三分之一，之后将芽体放置到温度为18‑25℃，湿度为20％‑60％的洁净的室内，自然阴干18‑24小时；(4).对外植体进行两次消毒：首先，用10％次氯酸钠溶液震荡消毒40分钟，之后用无菌水震荡冲洗两次，每次15分钟；然后将冲洗好的芽体置于无菌滤纸上，吸干表面水分，并剥去芽体表面2‑3片苞叶，切除假鳞茎基部表面的黄褐色的老旧组织；再剪切掉第(3)步中的剩余叶片长度的三分之二，并将芽体切成2‑3cm的大小，然后将处理好的芽体再次置于10％次氯酸钠溶液中震荡消毒30分钟；之后用无菌水再次震荡冲洗三次，每次5分钟；最后将冲洗好的芽体置于无菌滤纸上，剥除芽体表面1‑2片苞叶，切除假鳞茎基部所有老旧组织；切除剩余所有叶片；(5).完成消毒后切体及培养：将第四步中完成消毒后的芽体切成以生长点为中心的0.5‑0.7cm长度以获得无菌的茎尖生长组织，再转接入适宜的培养基中，并及时置于温度为20‑27℃的黑暗环境下以防止褐化并进行培养。