[发明专利]一种基于foldon介导的寡聚化阿魏酸酯酶的制备方法

摘要

本发明公开一种基于foldon介导的寡聚化阿魏酸酯酶的制备方法，设计优化并合成基因片段His‑fae‑linker‑foldon；将pPIC9K/His‑fae‑linker‑foldon工程菌诱导培养，分离纯化获得寡聚化阿魏酸酯酶。本发明应用目标蛋白与foldon结构域融合可自发形成三聚体结构的特性，设计linker完成阿魏酸酯酶在毕赤酵母中融合表达，以提高阿魏酸酯酶的催化性能；在pPIC9K/His‑fae‑linker‑foldon工程菌的表达培养过程中，将去淀粉麦麸加入培养基中，以提高阿魏酸酯酶的表达量；将寡聚化阿魏酸酯酶保存在特制的复合稳定剂中，其酶活稳定性大大提高。

主权项

1.一种基于foldon介导的寡聚化阿魏酸酯酶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：设计如SEQ ID No.1所示的linker序列，并根据阿魏酸酯酶FAEO42807的氨基酸序列对应的核苷酸序列，设计基因序列His‑fae‑linker‑foldon，并在两端分别加入SnaB I和Not I酶切位点，人工合成基因片段His‑fae‑linker‑foldon；将pPIC9K质粒及His‑fae‑linker‑foldon用SnaB I和Not I双酶切，用T4连接酶连接质粒pPIC9K和基因片段His‑fae‑linker‑foldon，构建并筛选pPIC9K/His‑fae‑linker‑foldon质粒阳性克隆子，并电转化至P.pastorisGS115表达，得到pPIC9K/His‑fae‑linker‑foldon工程菌；将pPIC9K/His‑fae‑linker‑foldon工程菌在培养基中诱导表达，诱导表达采用的诱导培养基的成分为：BMMY培养基，1～2％去淀粉麦麸；分离纯化获得寡聚化的阿魏酸酯酶；将寡聚化的阿魏酸酯酶保存在复合稳定剂中，所述复合稳定剂按质量份数计，包括：4～6份木聚糖酶且木聚糖酶的含量≥20000U/mL、2～4份纤维素酶且纤维素酶的含量≥10000U/mL、0.02～0.04份的MgSO4、7～9份的PEG400。