[发明专利]一种快速鉴定乳酸菌的质谱方法

摘要

本发明公开了一种快速鉴定乳酸菌的质谱方法，包括对乳酸菌的基质辅助激光解吸离子飞行质谱处理，处理过程包括：微生物细胞破碎、微生物蛋白质提取、质谱条件的优化与数据库分析，本发明消除了现有技术中对乳酸菌的检测存在的成本较高、可靠不稳定的问题，本方法实现了用质谱的方法快速鉴定乳酸菌，并在鉴定结果的基础上获得有效的蛋白质指纹图谱数据和差异性及共性的分析数据，不仅对乳酸菌的快速鉴定打开实用大门，也为乳酸菌的蛋白质分析与应用提供理论保障。

主权项

1.一种快速鉴定乳酸菌的质谱方法，其特征在于，包括对乳酸菌的基质辅助激光解吸离子飞行质谱处理，处理过程包括：微生物细胞破碎、微生物蛋白质提取、质谱条件的优化与数据库分析；微生物细胞破:挑取六个1.5ml无菌离心管分别放入适当菌量，①.加入0.75mL75％乙醇水溶液，液氮冷冻30s，37℃复融1min，反复1次，②加入0.75mL 75％乙醇水溶液，液氮冷冻30s，37℃复融1min，100HZ超声5min，③加入125μL 75％乙醇水溶液同时加入石英砂1‑3g，震荡均匀后，进行液氮研磨，研磨物转入离心管后，加入0.70mL 75％乙醇水溶液，以上3种处理后6000‑10000r/min离心2min，弃上清备用；微生物蛋白质提取：c：加入75μL 75％甲酸水溶液，震荡超声10min，加入75μL乙腈，震荡均匀，8000r/min离心2min，取上清1μL上样，d：加入75μL 50％甲酸水溶液，震荡超声10min，加入75μL乙腈，震荡均匀，8000r/min离心2min，取上清1μL上样，e：加入75μL 15％甲酸水溶液，震荡超声10min，加入75μL 50％乙腈水溶液，震荡均匀，8000r/min离心2min，取上清1μL上样，质谱条件的优化与数据库分析：包括设置质谱条件和数据库分析；质谱条件：固定聚焦337nm，检测器线性阳模式，MALDI离子源，激光束能频750Hz，收集范围1000～30000(m/z)，校准品ATCC 8739大肠杆菌，阈值峰积累类型基线模式，阈值偏差0.020mV,阈值相应1.200×；数据库分析：分离微生物获得的质谱峰图数据导入MALDI‑TOF/SARAMIS微生物鉴定系统进行标识峰识别，利用用SARAMIS Premium软件中的superpectrum对同种乳酸菌的标识峰进行筛选，数学方法拟合标识峰，进行超级谱图的构建，并对特征峰进行加权，构建经鉴定特定种乳酸菌的超级谱库，用于乳酸菌的鉴定。