[发明专利]一种细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物

摘要

本发明涉及细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物，可有效解决免疫逃逸、长循环，通过增强声疗联合NO化疗，促进肿瘤细胞凋亡的问题，其解决的技术方案是，中空介孔二氧化钛纳米粒表面通过酰胺化反应共价修饰血红蛋白，然后物理负载NO供体型化疗药物RRx‑001，最后与细胞经低渗裂解液和裂解处理、匀浆得到的细胞膜囊泡共挤压，即得细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物，本发明制备方法稳定可靠，生产费用低，制得的细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物在制备抗肿瘤药物方面可发挥增强声疗联合NO化疗的作用，增强抗肿瘤效果，同时具有免疫逃逸、长循环等多功能，生物相容性好，是肿瘤治疗药物上的创新。

主权项

1.一种细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物的制备方法，其特征在于，中空介孔二氧化钛纳米粒表面通过酰胺化反应共价修饰血红蛋白，然后物理负载NO供体型化疗药物RRx‑001，最后与细胞经低渗裂解液和裂解处理、匀浆得到的细胞膜囊泡共挤压，即得细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物，粒径为140‑200nm，具体包括以下步骤：1）将0.6‑1mL的正硅酸四乙酯加到装有0.3‑0.5mL超纯水、15‑25mL无水乙醇和0.6‑1mL氨水的烧瓶中，强烈搅拌10‑14h，10000‑15000rpm离心10‑20min，用无水乙醇洗至中性，得二氧化硅纳米粒；2）将步骤1）制得的二氧化硅纳米粒分散在10‑20mL无水乙醇和0.05‑0.15mL超纯水制成的溶液中，然后加入溶于2.5‑7.5mL无水乙醇的0.05‑0.15g羟丙基纤维素搅拌30min，成混合溶液，将0.5‑1.5mL叔丁醇钛溶于2.5‑7.5mL无水乙醇后，缓慢滴加到混合溶液中，80‑90℃回流90‑110min，10000‑15000rpm离心10‑20min，用无水乙醇洗2‑4次，得SiO₂@TiO₂复合物；3）将步骤2）中制得的SiO₂@TiO₂复合物分散于15‑25mL超纯水中，加0.1‑0.3gPVPk30，搅拌10‑14h，10000‑15000rpm离心5‑10min得沉淀，沉淀再分散于15‑25mL无水乙醇中，加入0.3‑0.5mL超纯水、0.6‑1mLTEOS和0.6‑1mL氨水，磁力搅拌3‑5h，10000‑15000rpm离心5‑10min，用无水乙醇洗至中性，得SiO₂@TiO₂@SiO₂复合物；4）将步骤3）中制得的SiO₂@TiO₂@SiO₂复合物研磨后，于马弗炉中400℃煅烧2‑4h，再分散于30‑50mL超纯水中，加1.5‑2.5mL2.5M的氢氧化钠溶液，80‑90℃回流搅拌6‑8h，10000‑15000rpm离心5‑10min，用超纯水洗至中性，得中空介孔二氧化钛纳米粒；5）将步骤4）制得的中空介孔二氧化钛纳米粒10‑50mg分散于4‑20mL无水乙醇，加入80‑400μL3‑氨丙基三乙氧基硅烷，再加入0.2‑1mL超纯水和0.2‑1mL氨水，25℃搅拌10‑14h，10000‑15000rpm离心5‑10min，用无水乙醇洗至中性，得氨基化的中空介孔二氧化钛复合物；6）将5‑50mg血红蛋白溶解于10mL溶剂中，加入10‑50mg1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和8‑38mgN‑羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌30min后，滴入含有步骤5）制得的5mg氨基化的中空介孔二氧化钛复合物的5mL溶剂分散液中，反应4‑12h，5000‑10000rpm离心5‑10min，用超纯水洗至中性，得血红蛋白修饰的中空介孔二氧化钛；所述的血红蛋白为人血红蛋白、牛血红蛋白或重组血红蛋白的一种；所述的溶剂为甲酰胺、PBS、MES的一种；7）将1mg步骤6）中制得的血红蛋白修饰的中空介孔二氧化钛和0.5‑4mgRRx‑001分散于5mL甲醇中，25℃下超声2‑4h，随即40‑50℃旋蒸，挥干甲醇，再加1‑2ml甲醇超声2‑4s复溶，10000‑15000rpm离心5‑10min，得血红蛋白修饰的负载RRx‑001的二氧化钛药物复合物，RRx‑001的载药量为20%～60%；8）消化收集贴壁细胞，加入低渗裂解液后对细胞进行裂解处理，机械或手动匀浆后，4℃3000‑3500g离心5min，收集上清，再于4℃10000‑15000g离心20‑40min，沉淀加超纯水0.5mL重悬，使用挤压器通过400nm聚碳酸酯膜挤压15‑25次，得细胞膜囊泡溶液；再与步骤7）制得的血红蛋白修饰的负载RRx‑001的二氧化钛药物复合物通过200nm聚碳酸酯膜共挤压，即得细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物；所述的细胞为乳腺癌细胞、肝癌细胞、胃癌细胞、肺癌细胞、红细胞、单核细胞、巨噬细胞的一种；所述的低渗裂解液为20mMTris‑HCl、10mMKCl、2mMMgCl₂和1mMPMSF的混合液，裂解处理为4℃放置1~3h、液氮和25℃反复冻融2~4次，每次置液氮中3S，25℃融化。