[发明专利]一种以癸酸为原料利用大肠杆菌工程菌制备10-羟基-2-癸烯酸的方法有效
| 申请号： | 201910088897.0 | 申请日： | 2019-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN109897870B | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | 苏静;王瑞明;王芬;孙淑慧;汪俊卿;杨晓慧 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12P7/42 | 分类号： | C12P7/42;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南竹森知识产权代理事务所(普通合伙) 37270 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用大肠杆菌工程菌制备10‑羟基‑2‑癸烯酸的方法，步骤如下：(1)构建重组质粒pBbB5K‑P450融合酶、重组质粒pBbB5K‑FadK、重组质粒pBbB5K–MCAD、重组质粒pBbB5K‑YdiI；(2)构建pBbB5K‑ydiI‑MCAD‑FadK‑P450融合酶组合质粒；(3)融合酶组合质粒转化大肠杆菌，经筛选，诱导培养，制得诱导细胞；(4)将诱导细胞经转化培养基培养，制得静息细胞，然后向培养基中加入癸酸，培养，制得10‑羟基‑2‑癸烯酸。本发明以癸酸为原料发酵生产10‑羟基‑2‑癸烯酸，实现以低值癸酸生产高附加值10‑羟基‑2‑癸烯酸的过程。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 癸酸 原料 利用 大肠杆菌 工程 制备 10 羟基 癸烯酸 方法 | ||
【主权项】：
1.一种以癸酸为原料利用大肠杆菌工程菌静息细胞制10‑羟基‑2‑癸烯酸的方法，其特征在于，步骤如下：(1)构建重组质粒pBbB5K‑P450融合酶、重组质粒pBbB5K‑FadK、重组质粒pBbB5K–MCAD、重组质粒pBbB5K‑YdiI；所述P450融合酶的表达基因核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；脂酰CoA合成酶基因FadK的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；脂酰CoA脱氢酶基因MCAD的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；酯酰辅酶A硫酯酶基因ydiI的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；(2)利用步骤(1)制得的重组质粒pBbB5K‑P450融合酶、重组质粒pBbB5K‑FadK、重组质粒pBbB5K–MCAD、重组质粒pBbB5K‑YdiI，构建pBbB5K‑ydiI‑MCAD‑FadK‑P450融合酶组合质粒；(3)取步骤(2)制得的pBbB5K‑ydiI‑MCAD‑FadK‑P450融合酶组合质粒转化到的大肠杆菌，经筛选，诱导培养，制得诱导细胞；(4)将步骤(3)制得的诱导细胞经转化培养基培养，制得静息细胞，然后向培养基中加入癸酸至浓度为4～10g/L，在25～35℃条件下培养，制得10‑羟基‑2‑癸烯酸；所述转化培养基组份如下，均为质量百分比：甘油0.8～1.2％,葡萄糖0.3～0.5％,抗生素40～60μg/mL，余量为pH7.4的浓度100mM的磷酸钾缓冲液。
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