[发明专利]一种提高腺相关病毒转染效率的方法

摘要

本发明属于细胞工程领域，具体涉及一种提高腺相关病毒转染效率的方法。本发明提供的提高腺相关病毒转染效率的方法，主要通过在细胞培养时，向营养液中添加细胞贴附因子，促进细胞贴壁，在转染过程中，选择pDeltaF6、pRep2Cap2及rAAV2EGFP，三种质粒按质量比为2：2：1的比例加入到转染混合液中，极大的提高了转染效率。利用本发明提供的腺相关病毒转染方法，转染效率可以高达80％‑90％，提高了病毒转染的成功率，而且，该方法操作简单，大大节约了实验成本。

主权项

1.一种提高腺相关病毒转染效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、细胞培养：将细胞复苏至T75放瓶中，使用含8％～10％牛血清及细胞贴附因子的营养液培养3代后，收获细胞状态较好的293T悬浮细胞，接种入10～20cm平皿进行培养，达到规定的细胞培养参数后，放入培养箱，设置好CO2培养箱的培养参数，培养20‑28h，细胞汇合率达到80％～90％，得含贴壁细胞的混合液；S2、将腺相关病毒三质粒转染入293T细胞：去掉步骤S1所得含贴壁细胞的混合液中的上清液，贴壁缓慢加入15～25mL含牛血清的DMEM培养液，然后混匀，逐滴加入含腺相关病毒的转染混合液，轻轻摇晃混匀，得转染混悬液；S3、293T细胞的孵育培养：将步骤S2所得转染混悬液放在含牛血清的营养液中孵育20～28h，然后取出放在CO2培养箱中，设置好孵育的培养参数，培养20～28h，弃掉上清液，加入无血清DMEM培养液，设置孵育后的培养参数，进行孵育培养40‑55h，得含腺相关病毒的混合液；S4、转染后观察：将步骤S3所得含腺相关病毒的混合液于1000‑1500r/min的速度下离心1～10min，收集细胞，在荧光显微镜下观察，同时使用流式细胞仪进行细胞转染率测定，即可。