[发明专利]一种提高EGFP质粒转染效率的方法

摘要

本发明属于细胞工程领域，具体涉及一种提高EGFP质粒转染效率的方法。本发明提供的提高EGFP质粒转染效率的方法，主要是在细胞培养时，向营养液中加入由青霉素，四环素及氨基糖苷按质量比5：5：2组成的三抗，由乙基己基甘油和山梨酸醇按质量比7：4组成的杀菌剂，提高质粒的纯度，避免各种杂菌的污染，同时，在转染过程中加一个1‑6h的静态或动态孵育过程，提高了EGFP质粒的转染效率。本发明提供的提高EGFP质粒转染效率的方法，可以显著提高EGFP质粒的转染效率，使EGFP质粒的转染达到80％以上的转染率，而且，本发明提供的转染方法操作过程简单，极大地节约了实验成本。

主权项

1.一种提高EGFP质粒转染效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、细胞培养：将细胞复苏至T75放瓶中，使用含有0.8～2g的三抗及0.5～1.5g的杀菌剂的营养液，培养3代后，收获细胞状态较好的293T悬浮细胞，分别接种入3个摇瓶中进行培养，达到规定的细胞培养参数后，放入培养箱，设置好CO₂恒温振荡培养箱的培养参数，培养3代至细胞达到特定条件，得含悬浮细胞的混悬液；S2、EGFP质粒转染293T悬浮细胞：将步骤S1所得含悬浮细胞的混悬液于1000～1500r/min的条件下离心1～10min，去除上清液，然后加入含EGFP质粒的转染混合液，轻轻摇晃混匀，得转染混悬液；S3、293T细胞的孵育培养：将步骤S2所得转染混悬液放入CO₂恒温振荡培养箱，设置好孵育培养参数，进行1～6h的静态或者动态孵育，孵育结束后加原体积一半的含有1％～20％牛血清及三抗的培养液进行培养，再设置好孵育后的培养参数，进行孵育后培养20～28h，得含EGFP质粒的混合液；S4、转染后观察：将步骤S3所得含EGFP质粒的混合液于1000‑1500r/min的速度下离心1～10min，弃掉全部上清液，加入不含血清的培养液，设置好换液后的培养参数，培养48～72h，取出细胞，在荧光显微镜下观察，即可。