[发明专利]一种不同结核分枝杆菌同时鉴定用试剂盒及其鉴定方法

摘要

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种不同结核分枝杆菌同时鉴定用试剂盒及其鉴定方法；本发明利用人结核分枝杆菌和牛分枝杆菌之间的基因组差异，设计1条上游引物和1条下游引物，根据扩增的靶片段分别设计两组Taqman探针，并对两组探针进行不同的荧光标记，两组探针中各包含三条探针，通过PCR技术扩增后的基因荧光强度与标准荧光值进行比对，可快速鉴定细菌类型，可定性判断溶液中所含细菌类型，在临床上有更大的应用前景。

主权项

1.一种不同结核分枝杆菌同时鉴定的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：S1：首先分别对牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌进行扩增，上游引物和下游引物为牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌的共用引物，牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌分别使用两种探针；牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌分别扩增10个循环，检测牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌分别自扩增10个循环后各自的荧光强度；S2：根据S1所测荧光强度，确定基础量K；基础K值为荧光强度与溶液体积的商；S3：将需要检测的溶液进行处理，加入1种上游引物，一种下游引物和两种探针，扩增30个循环；S4：对S3中30个循环后的细菌进行荧光检测，检测的荧光强度减去基础K值得到绝对荧光值，绝对荧光值与对照表进行对比，绝对荧光值与纯牛分枝杆菌和纯人结核分枝杆菌进行对比，最终定性确认溶液中包含哪一种结核杆菌。