[发明专利]一种鸡安卡拉病检测方法在审
| 申请号： | 201910121098.9 | 申请日： | 2019-02-19 |
| 公开（公告）号： | CN109706270A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 赵福振;苏惠龙;李儒曙;邵建宏;罗宝正;廖秀云;沙才华;陈轩;薄清如 | 申请（专利权）人： | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 519000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于禽类疾病检测技术领域，公开了一种鸡安卡拉病检测方法；准备质粒和毒株：提取样品DNA；设计与合成引物、探针；确定荧光反应体系和反应程序；取FAdV‑4合成质粒稀释浓度为107作为模板，使用各自的反应体系和反应条件进行荧光PCR反应检测扩增；对鸡安卡拉病检测方法进行灵敏度检测和特异性检测。本发明特异性强，在对其它血清型的质粒和鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗cDNA产物进行扩增后，未出现扩增曲线或条带；灵敏度高，荧光PCR可做到101拷贝的数量级；稳定性强；TaqMan方法配套扩增试剂便宜且方法成熟，接受程度高，可满足检测要求，适用于鸡中HPS病毒的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 质粒 荧光PCR 扩增 种鸡 传染性支气管炎 检测技术领域 荧光反应体系 灵敏度检测 特异性检测 反应程序 反应检测 反应条件 合成引物 鸡新城疫 扩增曲线 扩增试剂 禽类疾病 特异性强 稳定性强 样品DNA 活疫苗 灵敏度 血清型 毒株 拷贝 探针 条带 稀释 合成 病毒 成熟 配套 | ||
【主权项】：
1.一种鸡安卡拉病检测方法，其特征在于，所述的鸡安卡拉病检测方法包括以下步骤：步骤一：准备质粒和毒株：根据FAdV‑1、FAdV‑2、FAdV‑4、FAdV‑10的Fiber基因全序列合成质粒；鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗，提取RNA并反转录成cDNA；步骤二：提取样品DNA：取20份鸡肝脏、脾脏、肾脏并提取DNA；步骤三：设计与合成引物、探针：根据FADV的12种血清型的核苷酸序列，使用Clustal X进行比对，并通过Primer Express 3.0在高度保守区域设计特异性的荧光PCR引物、探针一套，并合成；步骤四：确定荧光反应体系和反应程序；取FAdV‑4合成质粒稀释浓度为107作为模板，使用各自的反应体系和反应条件进行荧光PCR反应检测扩增；步骤五：对鸡安卡拉病检测方法进行灵敏度检测和特异性检测。
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