[发明专利]从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法

摘要

本发明公开了一种从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法，本发明利用采用多重淋巴细胞表面标记物抗体的负筛选，以及快捷的荧光标记抗原物质方法的建立和利用荧光标记抗原物质来进行高特异性的筛选，从而实现对单个抗原特异性B淋巴细胞的高通量快速筛选，并且使最终获得抗体特异性B淋巴细胞的阳性率从传统杂交瘤方法的不足5％，提高至30％。所以，该方案不但能够极大程度缩短单克隆抗体开发的时间，而且能够大大提高所获得单克隆抗体的数量和多样性。

主权项

1.一种从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法，所述脾脏细胞为经过普通抗原免疫的脾脏细胞，其步骤如下：1)利用以生物标记的非B细胞淋巴细胞表面标志物抗体对脾脏细胞进行负筛选，再利用亲和素磁珠与磁性分离原理去除非B细胞，以提高脾脏细胞中B淋巴细胞相对丰度；2)利用荧光标记的IgM多克隆抗体和预标记筛选用抗原，对步骤1得到的脾脏细胞进行进一步负筛选，以流式细胞技术去表面不表达IgG分子的B细胞，保留与预标记筛选抗原结合的目标淋巴细胞；3)利用7‑AAD进行分选，去除死细胞；4)用流式细胞仪，进行单细胞的筛选，得到目标淋巴细胞。其中，所述预标记筛选抗原为与小分子荧光染料偶联的普通抗原。