[发明专利]一种评估CRISPR/Cas9基因编辑效率或脱靶频率的方法有效
| 申请号： | 201910128264.8 | 申请日： | 2019-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN109868283B | 公开（公告）日： | 2021-07-20 |
| 发明（设计）人： | 朱丽颖;郑月萍;徐雪珍;段芊芊;郑志富 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/20 |
| 代理公司： | 洛阳公信知识产权事务所(普通合伙) 41120 | 代理人： | 时亚娟 |
| 地址： | 311300 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种评估CRISPR/Cas9基因编辑效率或脱靶频率的方法，属于生物工程领域，主要包括三个部分：首先为了快速筛选转基因植株，选择标记基因mCherry插入表达载体中；其次为了快速鉴定CRISPR/Cas9基因的编辑效率和脱靶频率，将脂肪酸脱氢酶FAD2、FAD3作为靶基因插入载体中；最后利用靶基因突变后脂肪酸组分的变化，通过检测转基因阳性植株中C18不饱和脂肪酸的组成快速简便地筛选出被编辑的植株和未被编辑的植株，从而快速、准确、高效地确定特定的CRISPR/Cas9基因编辑系统的编辑效率和脱靶效应。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 评估 crispr cas9 基因 编辑 效率 脱靶 频率 方法 | ||
【主权项】：
1.一种评估CRISPR/Cas9基因编辑效率或脱靶频率的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：构建CRISPR/Cas9基因编辑载体：将荧光蛋白报告基因与编码sgRNA序列的DNA片段插入到携带CRISPR/Cas9的编辑载体中；所述sgRNA包含以脂肪酸去饱和酶FAD2或FAD3基因为基础设计获得的靶序列；步骤二：将步骤一构建好的载体利用农杆菌介导法转化植株，再利用荧光光蛋白报告基因筛选植株转基因后代；步骤三：利用植株脂肪酸组分的变化确定编辑效率或脱靶频率。
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