[发明专利]黄龙病胶体金多克隆抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201910142344.9 | 申请日： | 2019-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN109879960A | 公开（公告）日： | 2019-06-14 |
| 发明（设计）人： | 梁俊;甘国勇;覃建友;黄飞;冯莉婷;杨振媚;蔡艳虹;黄雪花;韦炳结;彭博林 | 申请（专利权）人： | 广西艾谱瑞生物科技有限公司;广西益谱检测技术有限公司;广西泰格瑞科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12;C12N15/70;C07K14/195 |
| 代理公司： | 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 11279 | 代理人： | 李秋琦 |
| 地址： | 530007 广西壮族自治区南*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了黄龙病胶体金多克隆抗体的制备方法，包含下列操作步骤：(1)从感染柑橘黄龙病原体的柑橘总DNA中克隆获得柑橘黄龙病毒的表面抗原基因序列，然后对表面抗原基因序列进行氨基酸预分析；(2)抗原制备；(3)抗原蛋白纯化；(4)抗体的制备。本发明制成黄龙病胶体金多克隆抗体操作简单，方便使用，操作人员对技术要求不高，无需进行特殊培训；制成胶体金检测工序简单，短时间内能得出结果；制成胶体金后所用试剂毒性低，对环境污染小。 | ||
| 搜索关键词： | 胶体金 多克隆抗体 制备 柑橘 表面抗原基因 胶体金检测 技术要求 抗原蛋白 抗原制备 时间内能 试剂毒性 病原体 预分析 氨基酸 总DNA 抗体 克隆 病毒 感染 培训 | ||
【主权项】：
1.黄龙病胶体金多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包含下列操作步骤：(1)从感染柑橘黄龙病原体的柑橘总DNA中克隆获得柑橘黄龙病毒的表面抗原基因序列，然后对表面抗原基因序列进行氨基酸预分析：(a)序列Blast比对，获得氨基酸信息；(b)进行跨膜域分析；(c)信号肽序列分析；(d)无序序列分析；(e)抗原性分析；(f)同源性分析；(2)抗原制备：根据上述分析得到的抗原序列，设计引物，构建大肠杆菌PET‑28a的表达载体，构建完成后，诱导的实现分泌表达，破菌分离上清沉淀，取上清液；,(3)抗原蛋白纯化：首先采用金属螯合镍柱进行亲和层析，利用高亲和Ni‑NTA纯化介质把螯合剂共价偶联到琼脂糖介质(4％交联)上，然后再与上清液螯合Ni2+进行纯化；(4)抗体的制备：纯化后的抗原蛋白注射到两只免疫动物体内，加强免疫多次后，检测血清效价，血清效价达到要求后常规提取抗清血，将所得抗血清流过抗原免疫亲和填料，抗血清中的抗黄龙病抗体与偶联在抗原免疫亲和填料上黄龙病特异吸附，洗掉杂质，用弱酸洗脱，即得黄龙病胶体金多克隆抗体。
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