[发明专利]一种人毛囊毛乳头细胞来源的外泌体提取方法

摘要

本发明属于细胞分泌物提取技术领域，公开了一种人毛囊毛乳头细胞来源的外泌体(DPC‑Exos)提取方法；通过可控电阻式脉冲感应(TRPS)分析、电镜、WesternBlot鉴定DPC‑Exos；将DPC‑Exos加入离体培养的人毛囊外根鞘细胞(ORSCs)的培养基中。鉴定发现DPC‑Exos直径约为105nm，表达肿瘤易感基因(TSG)101，分化簇(CD)9和CD63；DPC‑Exos促进人ORSCs的增殖和迁移，并检测到ORSCs中β‑catenin和Sonichedgehog(Shh)的mRNA和蛋白质水平经处理后上调；经皮注射DPC‑Exos加速了小鼠HF生长期启动并延缓了退行期发生。免疫组织化学分析显示β‑catenin和Shh表达水平在实验组毛囊中上调。DPC‑Exos有助于调节HF的生长发育和生长周期，并为临床脱发的治疗提供了新的潜在途径。

主权项

1.一种人毛囊毛乳头细胞来源的外泌体提取方法，其特征在于，所述人毛囊毛乳头细胞来源的外泌体提取方法包括以下步骤：第一步，健康人头皮中DPC和ORSC的分离培养；第二步，DPC‑Exos的分离和鉴定；第三步，DPC‑Exos经皮注射小鼠背部；第四步，组织形态学和免疫组化分析；第五步，细胞增殖试验；第六步，通过流式周期试验对ORSC进行细胞周期分析；第七步，通过划痕实验和Transwell实验对ORSC进行愈合和迁移能力检测；第八步，RT‑PCR检测毛囊生长关键信号分子β‑catenin和Shh基因表达水平；第九步，Western Blot检测毛囊生长关键信号分子β‑catenin和Shh蛋白表达水平；第十步，统计分析。