[发明专利]一种外膜蛋白酶T酶解组蛋白并进行质谱分析的方法

摘要

本发明属蛋白质分析技术领域，具体为一种外膜蛋白酶T酶解组蛋白并进行质谱分析的方法。本发明方法包括：从细胞或组织样本中采用酸提法抽提核心组蛋白，超滤纯化组蛋白后与外膜蛋白酶T进行特定条件下的孵育酶解，最后将酶解完成的肽段经过除盐处理，送入液相色谱‑质谱鉴定和定量翻译后修饰。本发明方法操作方便，步骤简单，避免了传统组蛋白分析中的衍生化步骤，可实现对组蛋白翻译后修饰的精确鉴定和定量。

主权项

1.一种外膜蛋白酶T酶解组蛋白并进行质谱分析的方法，其特征在于，利用底物特异性识别的外膜蛋白酶T直接与组蛋白进行一步酶切，产生适合于质谱分析长度的肽段，经过除盐以后进入液相色谱‑质谱分析，对发生修饰的肽段进行定性和定量分析；具体步骤为：（1）核心组蛋白提取：基于组蛋白的碱性特性，提取细胞核后用盐酸裂解提取核心组蛋白；（2）蛋白纯化：经步骤（1）酸提后的组蛋白样品进行超滤置换溶液，用水置换后换成酶解缓冲液，去除盐酸和其他杂质；使组蛋白处于酶解液环境；（3）蛋白酶解：向经步骤（2）处理后的蛋白中加入外膜蛋白酶T，外膜蛋白酶T和组蛋白的质量比1:(20‑50)，充分混合，25‑37摄氏度酶切12‑16小时，使蛋白质完全酶解成氨基酸长度在6‑20之间的肽段；（4）质谱分析：对上一步得到的酶解产物酸化中止并高速离心，通过除盐柱富集上清中的肽段，冻干，然后进行质谱检测。