[发明专利]C4植物叶肉细胞、维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法在审
| 申请号： | 201910179907.1 | 申请日： | 2019-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN109722409A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 林雪乔;刘明媚;李秀秀;秦晓春 | 申请（专利权）人： | 济南大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250022 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，本发明提供了设计出了一种C4植物的叶肉细胞与维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法，通过破壁机的不同档位的机械作用，分别得到叶肉细胞及维管束鞘细胞的类囊体膜，该工艺简单，容易操作。采用本工艺提取类囊体膜，提取时间短，且与酶解法相比，本发明的工艺简单，提取时间短，且处理量大，最后通过本发明可以分别得到叶肉细胞的类囊体膜及维管束鞘细胞的类囊体膜，从而获得需要的蛋白等。 | ||
| 搜索关键词： | 类囊体膜 维管束鞘细胞 叶肉细胞 分离提取 生物技术领域 工艺提取 机械作用 处理量 酶解法 破壁机 档位 蛋白 | ||
【主权项】：
1.一种C4植物叶肉细胞和维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取C4植物的叶片，清洗后擦掉水分，去掉叶片中间的叶脉，将叶片剪成0.5‑1cm小条；（2）取剪碎的叶片放入在冰箱提前预冷的破壁机中，加入预冷后的捣碎液，破碎至叶片外层的叶肉细胞80‑90％掉落；（3）低温过滤，捣碎液涮洗破壁机，再过滤，合并滤液，即为叶肉细胞；（4）将步骤（3）的滤渣加入预冷后的捣碎液，继续破碎至叶肉细胞90‑99%及以上掉落；过滤，留滤渣，弃滤液；（5）将步骤（4）的滤渣加入预冷后的捣碎液，破碎至维管束鞘细胞80‑95%及以上掉落，过滤，滤液即为维管束鞘细胞；（6）将步骤（3）的叶肉细胞，离心，加入预冷后的涨破液，搅拌，离心，加贮存液，放入液氮迅速冷冻放‑80℃冰箱保存，得到叶肉细胞的类囊体膜；（7）将步骤（5）得到的维管束鞘细胞，离心，加入预冷后的涨破液，搅拌，离心，加贮存液，放入液氮迅速冷冻放‑80℃冰箱保存，得到维管束鞘细胞的类囊体膜。
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