[发明专利]一种融合蛋白及其制备利拉鲁肽中间体多肽的方法在审
| 申请号： | 201910195438.2 | 申请日： | 2019-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN109879970A | 公开（公告）日： | 2019-06-14 |
| 发明（设计）人： | 潘尚书;汤传根;李宬;刘晓锐;崔怀言;陈松;张昊宁 | 申请（专利权）人： | 美药星（南京）制药有限公司;南京汉欣医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210038 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于多肽制备方法技术领域，特别涉及一种融合蛋白及其制备利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)的方法。其主要步骤包括构建重组利拉鲁肽中间体工程菌，通过培养和诱导大肠杆菌表达GLP‑1(7‑37)融合蛋白，再经过变性、复性、酶切和分离纯化得到中间体多肽GLP‑1(7‑37)。通过改变前导肽序列，表达方式变为胞内不溶性包涵体表达，表达量显著增加；洗涤后的包涵体采用碱性溶解，无需使用大量的变性剂，以蛋白浓度为5‑40g/L的高浓度加入包涵体溶解缓冲液，变复性时间不超过1h，溶解后可以立即进行肠激酶酶切；减少复性工序，缩小酶切体系，降低化学试剂成本，有利于工业化放大；采用离子交换分离纯化，分离度高。本发明制备的利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)达到92％以上，收率大于87％。 | ||
| 搜索关键词： | 利拉鲁肽 多肽 融合蛋白 包涵体 复性 制备 分离纯化 酶切 大肠杆菌表达 前导肽序列 溶解缓冲液 表达方式 多肽制备 化学试剂 碱性溶解 离子交换 酶切体系 变性剂 表达量 不溶性 肠激酶 分离度 工程菌 变性 构建 收率 洗涤 溶解 诱导 蛋白 放大 | ||
【主权项】：
1.一种融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为Leading Peptide‑DDDDK‑GLP‑1(7‑37)，包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，在利拉鲁肽中间体制备中，采用如下前导肽：MATHAVSVLKGDGX1VQGIINFEQHESNGX2VKVWGSIHGLX3EGLHGFHVHKFVNQHLCGX4HLVALX5LV，X1,X2：为P和Y中的任何一个氨基酸；X3,X4和X5：为S,T和Y中的任何一个氨基酸。
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