[发明专利]一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法

摘要

本发明提供一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，该技术方案首先探究了肺炎克雷伯氏菌的特异性分子标记，获得了一种对肺炎克雷伯氏菌具有专一指向性的蛋白质片段，以其作为标志物可用于肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷伯氏菌、鼻硬结克雷伯氏菌的种间鉴别。相对于现有技术的培养法和涂片法而言，本发明准确性更高，且可通过标志物蛋白含量近似性的推算肺炎克雷伯氏菌含量，从而在一定程度上实现定量检测。在以上技术方案的基础上，本发明开发了专用的取样装置，基于琼脂糖凝胶的附着作用和滤膜的拦截作用，在气流通过的过程中实现微生物的固着，再通过洗脱的方式将微生物分散至无菌水中，从而作为生物检材用于质谱分析。

主权项

1.一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，该方法应用到取样装置，所述取样装置包括壳体(1)，通道(2)，风机(3)，滤膜(4)，筛网(5)，其中壳体(1)围成一通道(2)，所述通道(2)具有两个端口，在所述两个端口处分别连接有风机(3)和滤膜(4)，在所述通道(2)中固定连接有若干筛网(5)；其特征在于所述检测方法包括以下步骤：1)将所述取样装置的壳体(1)、风机(3)、滤膜(4)、若干筛网(5)分别灭菌；将琼脂糖凝胶灭菌后降温至70℃，在无菌环境下将若干筛网(5)浸泡于灭菌后的琼脂糖凝胶中，取出筛网(5)在无菌环境下降至室温；2)在无菌环境下组装所述取样装置；将所述取样装置移至待测地点，启动风机(3)，以恒定的风速运行1min；而后拆卸所述取样装置的滤膜(4)和筛网(5)，将所述滤膜(4)和筛网(5)浸泡于70℃的无菌水中，恒温保持1min，另取新鲜无菌水冲洗滤膜(4)和筛网(5)，合并洗液，再用新鲜无菌水定容至300mL，得到待测样品；3)将所述待测样品离心取沉淀；分别通过乙醇、氯仿‑甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用；检测所述上清液中是否含有氨基酸序列为MLGGDAWPYEGC的肺炎克雷伯氏菌标志性蛋白质片段。