[发明专利]多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的方法在审
| 申请号： | 201910209767.8 | 申请日： | 2019-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN109929912A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 申阿东;王亚翠;王毅;焦伟伟;李洁琼;孙琳;肖婧;綦辉;申晨;徐放;祁雪;全舒婷 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学附属北京儿童医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京市众天律师事务所 11478 | 代理人： | 李新军 |
| 地址： | 100045 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法能够针对肺炎支原体P1基因进行特异性扩增，本发明还提供了用于上述恒温扩增方法的特异性引物组合。本发明提供的多交叉置换扩增方法可以在30分钟内完成整个MCDA扩增，在其对肺炎支原体的特异性基因P1的检测中，检测下限可以低至10fg，具有非常高的灵敏度。另外，本发明提供的扩增方法具有很高的扩增特异性。在对常见的致病菌、条件致病菌及非肺炎支原体DNA的检测中，均为阴性扩增，只有肺炎支原体呈特异性扩增，说明所建立的方法具有极高的特异性，能准确地鉴定肺炎支原体，无假阳性及假阴性结果产生。 | ||
| 搜索关键词： | 肺炎支原体 扩增 恒温扩增 特异性扩增 传感检测 纳米生物 检测 特异性引物组合 假阴性结果 特异性基因 条件致病菌 致病菌 目的基因 灵敏度 假阳性 阴性 置换 | ||
【主权项】：
1.一种多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：(1)提取待检测样品的基因组；(2)提供序列如SEQ ID NO:1所示的置换引物F1和序列如SEQ ID NO:2所示的置换引物F2，序列如SEQ ID NO:3所示的交叉引物CP1和序列如SEQ ID NO:4所示的交叉引物CP2；序列如SEQ ID NO:5所示的扩增引物C1和序列如SEQ ID NO:6所示的扩增引物C2，序列如SEQ ID NO:7所示的扩增引物D1和序列如SEQ ID NO:8所示的扩增引物D2，序列如SEQ ID NO:9所示的扩增引物R1和序列如SEQ ID NO:10所示的扩增引物R2；其中在引物C1或者C2的5’端标记半抗原，在引物D1或者D2的5’端标记生物素；(3)在链移位型聚合酶、解链温度调节剂、引物存在下，使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增DNA；(4)使用纳米生物传感器检测步骤(3)的扩增产物。
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