[发明专利]超低温脱除葡萄卷叶病毒-3方法及用途

摘要

本说明书实施例提供了一种超低温脱除葡萄卷叶病毒‑3方法及用途。所述方法包括以下步骤：取葡萄枝条单茎段，消毒杀菌后，继代在初代培养基上培养，将腋芽萌发的茎段继代到增殖培养基上培养，取含有5‑6片叶原基的茎尖栽到预培养基上，黑暗培养；将经过预培养基培养的茎尖在加载液中处理，之后，置于冰上，然后制成小滴；将冷冻保护剂包裹的茎尖放入液氮中，之后转移到卸载液中，进行解冻和卸载；将解冻后的茎尖移栽到恢复培养基上进行黑暗培养，得到不带葡萄卷叶病毒‑3的植株。

主权项

1.一种超低温脱除葡萄卷叶病毒‑3方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)，取葡萄枝条单茎段，消毒杀菌后，移栽到初代培养基上培养，得到腋芽萌发的茎段；其中，所述初代培养基的基础培养基为MS培养基，且在每升MS培养基添加25‑35g蔗糖；所述葡萄枝条为感染有葡萄卷叶病毒‑3的葡萄枝条；步骤(2)，将腋芽萌发的茎段栽种到增殖培养基上培养，取含有5‑6片叶原基的茎尖；其中，所述增殖培养基为培养基；步骤(3)，将含有叶原基的茎尖移栽到预培养基上，黑暗培养；其中，所述预培养基的配方包括0.4M蔗糖、0.2μM谷胱甘肽和0.16μM抗坏血酸；步骤(4)，将经过步骤(3)中预培养基培养的茎尖在加载液中处理，之后，置于冰上，得到冷冻保护剂滴包裹的茎尖；所述加载液的配方包括2M蔗糖和0.4M甘油；步骤(5)，将所述冷冻保护剂滴包裹的茎尖放入液氮中，之后转移到卸载液中，进行解冻和卸载；其中，所述卸载液含有1.2M蔗糖；步骤(6)，将解冻后的茎尖移栽到恢复培养基上进行黑暗培养，得到不带葡萄卷叶病毒‑3的茎尖；其中，所述恢复培养基的基础培养基为培养基，且含有0.6M蔗糖。