[发明专利]酵母表达载体构建及表达外切型纤维素酶的方法与应用在审
| 申请号： | 201910267343.7 | 申请日： | 2019-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN110029123A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 赵向辉;刘婵娟;瞿明仁;潘珂 | 申请（专利权）人： | 江西农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/66;C12N9/42;A23K20/189 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 330045 江*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种酵母表达载体构建及表达外切型纤维素酶的方法与应用，利用现代分子技术成功优化了编码香菇外切型纤维素酶的基因序列，构建了能够在酵母体外表达外切型纤维素酶的表达载体pPICZαA‑Cel7A，利用该载体和毕赤酵母能够制备外切型纤维素酶，进而为外切型纤维素酶在生产中的应用提供技术支撑。通过本发明方法获得的重组毕赤酵母菌酶产率高，活性高，效果佳。 | ||
| 搜索关键词： | 纤维素酶 外切 构建 酵母表达载体 毕赤酵母菌 毕赤酵母 表达载体 分子技术 基因序列 技术支撑 体外表达 应用提供 活性高 产率 酵母 制备 香菇 应用 优化 成功 | ||
【主权项】：
1.一种酵母表达载体构建方法，其特征在于，其步骤为：(1)对外切型纤维素酶基因片段进行密码子优化，两端加入EcoR I和Xba I酶切位点并合成新的基因序列如SEQ ID NO.1；(2)利用限制性内切酶EcoR I和Xba I对基因序列如SEQ ID NO.1的外切型纤维素酶基因片段进行双酶切，胶回收外切型纤维素酶基因片段；(3)利用与步骤2中相同的限制性内切酶双酶切表达载体pPICZαA；(4)将步骤2中胶回收的外切型纤维素酶基因片段与步骤3中切后的pPICZαA载体连接，通过热击法导入大肠杆菌感受态细胞DH5α构建得到重组表达载体pPICZαA‑Cel7A，再利用质粒提取试剂盒从重组大肠杆菌中提取表达载体质粒pPICZαA‑Cel7A。
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