[发明专利]一种基于微滴数字PCR技术的EGFR检测方法和应用在审
| 申请号： | 201910268321.2 | 申请日： | 2019-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN110129437A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 施明耀;卢佩莹;辜凯琪 | 申请（专利权）人： | 施明耀;卢佩莹;辜凯琪 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 太原华弈知识产权代理事务所 14108 | 代理人： | 黄海燕 |
| 地址： | 中国香港沙田科*** | 国省代码： | 中国香港;81 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用微滴数字化PCR技术用于检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中游离DNA(cfDNA)的EGFR基因突变的方法及其应用。本发明提供的Sanomics plasma EGFR检测方法使用非侵入性标本检测EGFR突变，核酸用量较低，最小核酸用量要求仅为10ng，从样本接收到给出结果报告整个检测周转时间仅为2天，具有超高的灵敏度，可检测灵敏度低至0.1％，可同时检测与TKI治疗相关的致敏和抗性突变，如E19缺失、E21 L858R、E20 T790M、E 20 C797S突变，提供突变等位基因频率(MAF)报告。对于NSCLC患者的动态治疗及预后的监测具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 突变 灵敏度 微滴 检测 非小细胞肺癌 突变等位基因 标本检测 动态治疗 方法使用 非侵入性 患者血浆 结果报告 样本接收 用量要求 重要意义 数字PCR 游离DNA 可检测 小核酸 预后 抗性 核酸 致敏 应用 数字化 周转 监测 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种基于微滴数字PCR的血浆EGFR突变检测方法，包括如下步骤：(1)血浆分离和血浆DNA提取(2)Master mix混合液制备(3)微滴生成(4)封板(5)热循环(6)微滴读取(7)数据分析所述步骤(1)采用Qiagen ![]()
DSP DNAMini试剂盒，包括利用真空系统提取DNA和Qubit测量DNA浓度的步骤；所述Master mix含有用于检测EGFR外显子19缺失、外显子21L858R突变、外显子20T790M突变、外显子20C797S突变中一种或多种的引物或探针；所述步骤(3)采用QX200TM微滴生成仪和DG8TM微滴发生卡；所述步骤(4)采用PX1TM PCR封板仪；所述步骤(5)采用C1000TouchTM PCR热循环仪；所述步骤(6)采用QX200微滴分析仪和QuantaSoftTM软件。
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