[发明专利]一种基于酶催化碘化钾氧化显色检测过氧化氢含量的分光光度法

摘要

本发明公开了一种基于酶催化碘化钾氧化显色检测过氧化氢含量的分光光度法，本发明的分光光度法以过氧化氢酶为催化剂、以碘化钾为指示剂，能够快速检测溶液中过氧化氢含量。本发明与现有测定方法相比，利用过氧化氢酶催化过氧化氢快速氧化碘化钾生成碘单质，碘单质进一步与溶液中过量的碘离子反应生成碘三阴离子来测定过氧化氢含量，即在含有过氧化氢酶、过氧化氢以及碘化钾的反应液中，过氧化氢酶与过氧化氢首先快速反应生成中间产物，然后碘化钾与生成的中间产物快速反应生成碘单质，碘单质又进一步与过量的碘离子反应生成碘三阴离子，再依据碘三阴离子在特定吸收波长处的吸光度值来测定水中过氧化氢浓度。

主权项

1.一种基于酶催化碘化钾氧化显色检测过氧化氢含量的分光光度法，其特征在于：包括如下步骤：(1)建立标准曲线及其线性回归方程：将过氧化氢酶溶液和碘化钾溶液加入到缓冲溶液中得第一混合溶液，然后测定第一混合溶液在特定吸收波长处的吸光度值，并校零；分别向上述第一混合溶液中加入不同浓度的过氧化氢标准样形成第二混合溶液，使过氧化氢在第二混合溶液中形成0‑100μmol L^‑1的浓度梯度；将第二混合溶液于4‑36℃进行氧化显色反应8‑45s后，测定第二混合溶液在上述特定吸收波长处的吸光度值，记为a；以a作为横坐标，以过氧化氢在第二混合溶液中的最终浓度作为纵坐标，建立标准曲线及其线性回归方程；其中，过氧化氢酶溶液的活度为400‑1600units L^‑1，碘化钾溶液的浓度为20‑60mmol L^‑1，缓冲溶液的pH值为4.0‑7.0，且上述过氧化氢酶溶液、碘化钾溶液与缓冲溶液的体积比为0.002‑0.06∶0.02‑0.44∶1；(2)测定待测样品中过氧化氢含量：向上述第一混合溶液中加入待测样品形成第三混合溶液，于4‑36℃进行氧化显色反应8‑45s后，测定显色后第三混合溶液在上述特定吸收波长处的吸光度值，记为b；将b代入到步骤(1)中所得标准曲线的线性回归方程中，再通过待测过氧化氢样品与第三混合溶液的体积关系计算得出待测的过氧化氢样品中过氧化氢的含量；上述特定吸收波长为350nm或400nm。