[发明专利]一种香蕉枯萎病菌myosin-1基因敲除突变体的构建方法

摘要

本发明提供一种香蕉枯萎病菌myosin‑1基因敲除突变体的构建方法。使用Split‑marker基因敲除技术，采用PEG介导的方法进行原生质体转化，通过同源重组获得了Foc4myosin‑1基因敲除突变体。通过测定突变体菌株的生物学表型、致病力及对氰烯菌酯(JS399‑19)的敏感性，研究myosin‑1基因在Foc4的生长发育、致病力及对氰烯菌酯抗药性中的作用。结果表明，与Foc4野生型菌株相比，myosin‑1基因敲除突变体表现生长缓慢、产孢量减少、菌丝分支增多，对巴西蕉苗的致病力明显减弱，对氰烯菌酯的抗性显著增强。由此推测myosin‑1基因可能在Foc4的生长发育、产孢、致病力以及抗药性等方面发挥重要作用。

主权项

1.一种香蕉枯萎病菌myosin‑1基因敲除突变体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)myosin‑1基因敲除重组片段扩增引物FOC4MYOS‑LBCK和FOC4MYOS‑HPH‑LB‑R扩增myosin‑1基因上游片段，引物FOC4MYOS‑RBCK和FOC4MYOS‑HPH‑RB‑F扩增myosin‑1基因下游片段；引物HYG‑F和HYG‑R扩增潮霉素基因片段；用引物FOC4MYOS‑LB‑F和HYG‑R1来扩增上游重组片段，用引物HYG‑F1和FOC4MYOS‑RB‑R来扩增下游重组片段；2)将原生质体与上下游重组片段混匀，进行遗传转化，获得转化子，进行鉴定；所述引物FOC4MYOS‑LBCK、FOC4MYOS‑HPH‑LB‑R、FOC4MYOS‑RBCK、FOC4MYOS‑HPH‑RB‑F、HYG‑F、HYG‑R、FOC4MYOS‑LB‑F、HYG‑R1、HYG‑F1和FOC4MYOS‑RB‑R的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10所示。