[发明专利]一种用于生物样本中RNA的基因检测方法

摘要

本发明属于医疗技术领域，尤其为一种用于生物样本中RNA的基因检测方法，检测试剂盒中主要包括(1)样本处理液；(2)漂洗液；(3)洗脱液；(4)反应液A；(5)反应液B；本发明方法将生物体的组织或体液在样本处理液中进行剧烈震荡后在50℃～80℃范围内进行保温消化，消化后的悬浊液经酚氯仿进行分离，含有RNA的上清液经吸附柱进行分离，经过洗涤和洗脱后，将反应液A加入洗脱液进行37℃～50℃保温，保温后产物与反应液B混匀进行PCR扩增，PCR反应结果通过实时荧光定量PCR仪或数字PCR仪进行分析，本发明在解决传统RNA易降解的难题的同时将传统上对RNA样本处理到PCR分析的时间从大于8小时减少至3小时。

主权项

1.一种用于生物样本中RNA的基因检测方法，采用4步法进行RT‑PCR检测方法，所述方法包括：S1：设计与目标基因互补匹配的特异性寡核苷酸单链引物、一对特异性引物及探针；S2：取待测样本，加入样本处理液后进行剧烈震荡1～2min，再加入0.5～2倍样本体积的水饱和酚，剧烈震荡1～2min，混合样本在50℃～70℃中保温5～20min；S3：保温后的混合样≥12000rpm离心1～5min，取上清加入核酸吸附柱；S4：≥12000rpm离心1～2min，弃流出液，加入300～800μl漂洗液漂洗，室温静置1～2min，≥12000rpm离心1～2min，弃流出液，漂洗1～2次；S5：加洗脱液30～50μl，吸附柱在50～70℃下温浴3～10min；S6：将吸附柱转移到新的1.5ml或2ml离心管中，12000rpm离心1～2min，收集流出液；S7：步骤(6)离心管中加入5μl反应液A，42℃温浴10min；S8：步骤(7)离心管中加入20μl反应液B，进行实时荧光定量PCR扩增分析或PCR产物进行电泳分析。